人肝外膽管癌神經(jīng)浸潤與轉(zhuǎn)移的初步研究.pdf

1、膽管癌是消化系統(tǒng)重要的惡性腫瘤。其惡性度高、診治困難、預(yù)后不良，嚴(yán)重威脅人類的健康。目前認(rèn)為，根治性手術(shù)切除是膽管癌惟一有效的治療手段。盡管近年來診療技術(shù)有了較快發(fā)展，但其5年存活率仍然只有5％左右，主要原因是術(shù)后極易復(fù)發(fā)。 浸潤和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤重要的生物學(xué)特性，也是腫瘤重要的預(yù)后因素之一。傳統(tǒng)認(rèn)為，惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移途徑主要有四種：局部浸潤、血道轉(zhuǎn)移、淋巴轉(zhuǎn)移和腹腔廣泛種植。 本研究旨在前期研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，對膽管癌的神經(jīng)

2、浸潤和轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性進(jìn)行初步的研究和探索，著重探討神經(jīng)生長因子在此過程中的作用，以期能夠?yàn)榕R床治療研究提供備選分子靶點(diǎn)，并對這一較為特殊的現(xiàn)象有所認(rèn)識和總結(jié)。 第一部分：神經(jīng)生長因子與膽管癌臨床病理特征的相關(guān)性分析 論文1：膽管癌神經(jīng)浸潤的臨床病理分析 目的:總結(jié)分析膽管癌神經(jīng)浸潤的臨床病理特點(diǎn)，與腹痛或背痛、淋巴轉(zhuǎn)移、病理類型以及腫瘤分期的關(guān)系。 結(jié)論 1.神經(jīng)浸潤與膽管癌的病理低分化、淋巴轉(zhuǎn)

3、移以及TNM分期密切相關(guān)，是膽管癌的重要病理特征之一，可能有助于判斷膽管癌的預(yù)后。 2.神經(jīng)浸潤是膽管癌發(fā)生中的早期事件，提示膽管癌是一種高惡性、高浸潤性生長的腫瘤。 3.疼痛產(chǎn)生的原因是多方面的，神經(jīng)浸潤可能是其中重要原因之一，單純靠疼痛這一單一因素，不能判斷有否神經(jīng)浸潤。 論文2：神經(jīng)生長因子與人膽管癌神經(jīng)浸潤的相關(guān)性研究 目的:探討神經(jīng)生長因子及其酪氨酸激酶受體A與人膽管癌神經(jīng)浸潤、淋巴轉(zhuǎn)移、病理類

4、型以及腫瘤分期的關(guān)系。 結(jié)論 1.NGF與膽管癌神經(jīng)浸潤密切相關(guān)，也與腫瘤的TNM分期密切相關(guān)。檢測膽管癌組織NGF的表達(dá)情況，可能有助于判斷預(yù)后。 2.NGF可能通過旁分泌途徑與TrkA作用促使癌細(xì)胞延神經(jīng)轉(zhuǎn)移；通過自分泌途徑促進(jìn)膽管癌細(xì)胞增殖。 第二部分：穩(wěn)定表達(dá)神經(jīng)生長因子的膽管癌細(xì)胞的建立與培養(yǎng) 論文3.神經(jīng)生長因子真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定 目的:構(gòu)建人β-NGF真核表達(dá)載體并鑒定，

5、為轉(zhuǎn)染膽管癌細(xì)胞奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 結(jié)論:成功構(gòu)建β-NGF真核表達(dá)載體pcDNA3.0-NGF，可用于后續(xù)試驗(yàn)。為研究NGF在膽管癌細(xì)胞中的作用奠定試驗(yàn)基礎(chǔ)。 論文4.pcDNA3.0-NGF轉(zhuǎn)染人膽管癌細(xì)胞及其鑒定 目的:進(jìn)一步檢測pcDNA3.0-NGF質(zhì)粒的構(gòu)建結(jié)果；建立能穩(wěn)定表達(dá)NGF蛋白的人膽管癌QBC939細(xì)胞。 結(jié)論 1.轉(zhuǎn)染pcDNA3.0-NGF后確能增強(qiáng)β-NGF在膽管癌細(xì)胞QB

6、C939中的表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)此前的質(zhì)粒構(gòu)建工作是成功的。 2.成功建立能夠高表達(dá)NGF的膽管癌細(xì)胞，為研究NGF在膽管癌細(xì)胞中的作用奠定試驗(yàn)基礎(chǔ)。 第三部分：神經(jīng)生長因子對人膽管癌細(xì)胞體外增殖活性和侵襲力的影響 論文5：神經(jīng)生長因子對人膽管癌細(xì)胞體外增殖活性和侵襲力的影響 目的:探討膽管癌細(xì)胞源性神經(jīng)生長因子對人膽管癌細(xì)胞系QBC939體外增殖活性和侵襲力的影響。 結(jié)論:膽管癌細(xì)胞源性的β-NGF

7、具有促進(jìn)膽管癌細(xì)胞系QBC939體外增殖活性和侵襲力的作用。 第四部分：神經(jīng)生長因子對人膽管癌細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤及轉(zhuǎn)移能力影響的研究 論文6：神經(jīng)生長因子對人膽管癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤及轉(zhuǎn)移能力的影響 目的:探討膽管癌細(xì)胞源性神經(jīng)生長因子對人膽管癌細(xì)胞系QBC939體內(nèi)成瘤及轉(zhuǎn)移能力的影響。 結(jié)論 1.膽管癌細(xì)胞源性神經(jīng)生長因子具有增強(qiáng)膽管癌細(xì)胞成瘤能力的作用。 2.高表達(dá)神經(jīng)生長因子的膽管癌細(xì)胞成

8、瘤速度快，易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，與腫瘤預(yù)后密切相關(guān)。 小結(jié) 本研究首先通過對臨床病例和病理標(biāo)本的檢測分析，探討NGF與膽管癌臨床病理特征之間的關(guān)系，進(jìn)而通過體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)研究NGF在膽管癌發(fā)展中的作用。通過以上研究結(jié)果的分析，得出以下結(jié)論： 1.38％(35/92)的肝外膽管癌可出現(xiàn)神經(jīng)浸潤，且神經(jīng)浸潤與腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移、低分化水平以及TNM分期緊密相關(guān)，是影響腫瘤預(yù)后的重要因素。 2.神經(jīng)生長因子高表達(dá)于膽管癌組

9、織，其表達(dá)強(qiáng)度與膽管癌的神經(jīng)浸潤、低分化水平、淋巴轉(zhuǎn)移以及TNM分期密切相關(guān)，提示NGF可能是參與膽管癌神經(jīng)浸潤和惡性進(jìn)展的重要細(xì)胞因子。由于NGF的高親和力受體TrkA亦表達(dá)于膽管癌細(xì)胞膜，從而提示，膽管癌細(xì)胞可能通過自分泌途徑促進(jìn)自身的增殖與侵襲。 3.轉(zhuǎn)染β-NGF基因后的膽管癌細(xì)胞，其增殖活性和侵襲力顯著增強(qiáng)，且與膽管癌細(xì)胞β-NGF的表達(dá)量正相關(guān)，呈量-效依賴關(guān)系。 4.腫瘤細(xì)胞源性β-NGF能夠顯著縮短膽管癌

10、細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤時(shí)間，提高其成瘤速度，增強(qiáng)膽管癌的生長及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力。 5.由于目前尚無判斷膽管癌預(yù)后的有效臨床檢測指標(biāo)，NGF的檢測可能有助于判斷膽管癌的預(yù)后。 本研究所做工作具有如下創(chuàng)新性： 1.通過對92例膽管癌病人的臨床資料和病理學(xué)分析，明確闡述了神經(jīng)生長因子與人肝外膽管癌病理特征之間的關(guān)系：神經(jīng)生長因子與膽管癌的神經(jīng)浸潤、細(xì)胞低分化、淋巴轉(zhuǎn)移以及TNM分期密切相關(guān)。 2.神經(jīng)浸潤是膽管癌發(fā)展