用灰思維建立中藥半仿生提取研究的技術平臺.pdf

1、目的:以香附為例,半仿生提取法(SBE法)制備分子量≤1000Da提取物為最終產(chǎn)物,探討含揮發(fā)性成分的中藥藥效物質用SBE法研究的基本思路與模式。
　　方法:①首先對香附飲片進行基源、性狀鑒定與質量標準研究;②在優(yōu)選出香附超臨界流體萃取條件的基礎上,用相同的飲片、設備、技術參數(shù)作SFE-CO2萃取,萃取物另器保存,其藥渣采用均勻設計法,以分子量≤1000Da提取物、HPLC總面積為指標,綜合評判,優(yōu)選出SBE法制備分子量≤1000

2、Da提取物的條件;③在乙醇濃度30％-80%范圍內,采用比例分割法,以上述相同的指標和評判方法,優(yōu)選出香附經(jīng)SFE-CO2后藥渣醇提及醇沉制備分子量≤1000Da提取物的較佳醇濃度;④以相同的指標和評判方法,作該藥渣5種方法(SBE法、WE法、AE法、SBAE法、WAE法)分子量≤1000Da提取物的多指標成分比較;⑤因化學等值不一定生物等效,故作該藥渣5種提取方法分子量≤1000Da提取物的主要藥效及毒性比較;⑥對香附經(jīng)SFE-CO2

3、后藥渣5種提取方法分子量≤1000Da提取物及其兔含藥血清作HPLC指紋圖譜的研究比較;⑦對5種提取方法分子量≤1000Da提取物的兔含藥血清作兔離體腸平滑肌作用的研究比較;⑧最后綜合評判分析,優(yōu)選出香附經(jīng)SFE-CO2后藥渣的最佳提取方法和工藝條件。
　　結果:①香附符合《中國藥典》2005版一部各項下規(guī)定,為合格的飲片;②優(yōu)選出SBE法制備分子量≤1000Da提取物的條件為:3煎用水的pH依次為:2.0,6.5,9.0;提取時

4、間依次為:2.0、1.0、1.0h;③優(yōu)選出半仿生提取液的最佳醇沉濃度為60%,最佳醇提濃度為55%;④香附經(jīng)SFE-CO2后藥渣5種方法分子量≤1000Da提取物的綜合指標評判值順序為:YSBE＞YAE＞YWE＞YSBAE＞YWAE;⑤主要藥效學實驗結果表明,5種方法分子量≤1000Da提取物,以SBE法的藥效作用最強;急性毒性實驗表明,5種方法分子量≤1000Da提取物基本無毒;⑥香附經(jīng)SFE-CO2后藥渣5種方法分子量≤1000D

5、a提取物及其含藥血清HPLC指紋圖譜比較結果顯示,特征峰總面積以SBE液組最大;⑦5種提取方法分子量≤1000Da提取物的含藥血清,以SBE法含藥血清對離體腸的抑制作用最強;⑧綜合評判結果表明,香附經(jīng)SFE-CO2后藥渣以SBE法提取為佳。
　　結論:對于香附的提取,先以SFE-CO2萃取其揮發(fā)性及非極性成分,其藥渣再用SBE法提取,經(jīng)離心-膜濾法制得分子量≤1000Da提取物;SBE法≤1000Da提取液及其含藥血清與其他提取方