以慈航丹方藥探討含揮發(fā)性成分復(fù)方用“半仿生提取法”研究的模式.pdf

1、目的:以慈航丹方藥為例,通過半仿生提取法(SBE法)制備分子量≤1000Da提取物為最終產(chǎn)物,探討含揮發(fā)性成分的中藥復(fù)方藥效物質(zhì)用“SBE法”研究的基本思路與模式。
　　方法:①首先對(duì)慈航丹方藥進(jìn)行基源、性狀鑒定與質(zhì)量鑒定研究;②將方中含揮發(fā)性藥物(當(dāng)歸、川芎、香附)用超臨界流體萃取,以均勻設(shè)計(jì)U7(75)表發(fā)布點(diǎn)試驗(yàn),在飲片、設(shè)備、技術(shù)參數(shù)相同的基礎(chǔ)上作SFE-CO2萃取,萃取物另器保存;以藁苯內(nèi)酯、鹽酸川芎嗪、α-香附酮、總萃

2、取物為指標(biāo),綜合評(píng)判,優(yōu)選出方藥超臨界萃取(SFE-CO2)較佳工藝條件;③將超臨界萃取后的藥渣與方中益母草混合,用半仿生法提取,采用均勻設(shè)計(jì)U9(91×33)表發(fā)布點(diǎn)試驗(yàn),以鹽酸水蘇堿、鹽酸川芎嗪、阿魏酸、總糖及分子量≤1000Da提取物為指標(biāo),綜合評(píng)判,優(yōu)選出SBE法制備分子量≤1000Da提取物的條件;④在乙醇濃度30％-80%范圍內(nèi),采用比例分割法,以上述相同的指標(biāo)和評(píng)判方法,優(yōu)選出方藥醇提制備分子量≤1000Da提取物的較佳醇

3、濃度;⑤以上述相同的指標(biāo)和評(píng)判方法,作方藥3種方法(SBE法、WE法、AE法)分子量≤1000Da提取物的多指標(biāo)成分比較;⑥因化學(xué)等值不一定生物等效,故作方藥3種方法分子量≤1000Da提取物的活血調(diào)經(jīng)、止痛、抗炎等主要藥效及毒性的研究比較;⑦對(duì)方藥3種方法分子量≤1000Da提取物藥液及其兔含藥血清作HPLC指紋圖譜的研究比較;⑧對(duì)方藥3種方法分子量≤1000Da提取液的兔含藥血清作大鼠離體子宮平滑肌作用的研究比較;⑨最后綜合評(píng)判分析

4、,優(yōu)選出慈航丹方藥的最佳提取方法和工藝條件。
　　結(jié)果:①方中所用的中藥皆符合《中國(guó)藥典》2005版一部各項(xiàng)下規(guī)定,均為合格的飲片;②優(yōu)選出慈航丹方中含揮發(fā)性成分的中藥超臨界流體萃取的工藝條件為:萃取壓力30MPa、萃取溫度48℃、解析溫度Ⅰ60℃、解析溫度Ⅱ30℃、萃取時(shí)間4.0h。③優(yōu)選出慈航丹方藥的SBE法工藝條件為:3煎用水的pH依次為:6.0、7.5、8.8;提取時(shí)間依次為2.0h、1.5h、1.5h。④優(yōu)選出醇提的最佳

5、濃度為80%;⑤3種方法提取液的綜合評(píng)判值的順序?yàn)?YSBE＞YAE＞YWE;⑥以SBE液的含藥血清HPLC指紋圖譜,優(yōu)選出兔的最佳采血時(shí)間為1.5h;給藥劑量為7.0g·Kg-1(生藥·體重-1);3種方法提取液及其含藥血清的HPLC指紋圖譜比較研究結(jié)果表明,以SBE組色譜中特征峰峰數(shù)最多,特征峰總面積最大,共有峰重疊率最高;⑦3種方法提取液的主要藥效試驗(yàn)研究結(jié)果表明,SBE液的活血調(diào)經(jīng)、止痛、抗炎作用的效果最強(qiáng);該試驗(yàn)結(jié)果與用多指標(biāo)

6、綜合評(píng)判的提取工藝優(yōu)選結(jié)果及指紋圖譜的比較研究結(jié)果相吻合;最大耐受量試驗(yàn)動(dòng)物無一死亡,3種方法提取液的毒理學(xué)研究結(jié)果無顯著性差異;⑧3種方法提取液含藥血清對(duì)大鼠離體子宮平滑肌的收縮頻率、收縮張力和收縮幅度均有抑制作用;與對(duì)照組比較,均有顯著性差異(P＜0.05);與SBE組相比,AE組、WE組亦有顯著性差異(P＜0.05),其中SBE液的抑制作用最強(qiáng);⑨綜合評(píng)判結(jié)果表明,慈航丹方藥的3種提取方法中,以SBE法為最佳。
　　結(jié)論:慈

7、航丹方藥的提取,以先將含揮發(fā)性成分的中藥用SFE-CO2萃取,其藥渣與方中益母草混合,再用SBE法提取,經(jīng)離心-膜濾法制得分子量≤1000Da提取物,其多指標(biāo)綜合評(píng)判效果最佳;SBE法分子量≤1000Da提取液及其含藥血清與其他提取方法(AE法、WE法)分子量≤1000Da提取液作相應(yīng)比較,以SBE法提取液的藥效物質(zhì)含量高,藥理作用最強(qiáng)。因此,慈航丹方藥以SBE法提取為佳。本研究將化學(xué)成分(鹽酸水蘇堿、鹽酸川芎嗪、阿魏酸、總糖)及分子量