魚藤酮對(duì)大鼠腦內(nèi)DA能神經(jīng)元影響的實(shí)驗(yàn)研究及其機(jī)制探討.pdf

1、帕金森病(Parkinson's disease，PD)是發(fā)生在中老年人群中較為常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其主要臨床表現(xiàn)為靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌張力增高等癥狀。其特征性病理變化是中腦黑質(zhì)多巴胺(DA)能神經(jīng)元變性壞死。研究者對(duì)PD的病因及發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了大量的科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，提出許多可能的病因如:遺傳因素、環(huán)境毒素、年齡、氧化應(yīng)激損傷等，其中氧化應(yīng)激損傷越來越引起廣大研究者的關(guān)注。
　　 魚藤酮是一種來源于某些植物根莖、被廣泛

2、使用的一種殺蟲劑，其主要藥理作用是抑制細(xì)胞呼吸鏈對(duì)氧的利用，造成內(nèi)呼吸抑制性缺氧，從而導(dǎo)致體內(nèi)氧自由基聚集，對(duì)機(jī)體造成嚴(yán)重?fù)p傷。最近的研究顯示長(zhǎng)期接觸魚藤酮的大鼠可損傷其中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)元，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)減少、肢體震顫等PD樣癥狀。但是關(guān)于其損傷DA能神經(jīng)元的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚。
　　 氧化應(yīng)激就是指當(dāng)機(jī)體受到外界刺激時(shí)使抑制自由基產(chǎn)生的機(jī)制減弱或自身自由基生成量增加，引起機(jī)體自身組織的應(yīng)激反應(yīng)，從而造成組織器官的不可逆性損傷。氧

3、化應(yīng)激可造成大量活性氧的產(chǎn)生和在體內(nèi)堆積，并繼發(fā)細(xì)胞損傷，導(dǎo)致組織細(xì)胞變性和凋亡。目前大量的科學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)PD患者黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元受到氧化應(yīng)激損害。
　　 依據(jù)以上的理論依據(jù)我們推斷，魚藤酮可抑制內(nèi)呼吸，造成體內(nèi)自由基生成過多，在黑質(zhì)DA能神經(jīng)元中發(fā)生氧化損傷。臨床上改善氧化應(yīng)激，減少氧自由基的毒性作用可以為PD的臨床治療提供一個(gè)新的靶點(diǎn)。
　　 目的:本研究擬采用大鼠背部皮下注射魚藤酮后對(duì)其中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)體系及

4、氧化應(yīng)激參數(shù)（丙二醛和谷胱甘肽）的影響，探討魚藤酮對(duì)DA能神經(jīng)元毒性作用及其發(fā)病機(jī)制，為闡明PD的病因及發(fā)病機(jī)制提供直接的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)為其治療提供新的靶點(diǎn)。
　　 方法:選用雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組背部皮下注射魚藤酮（溶解在葵花油中）50天，1次/日;對(duì)照組注射葵花油50天。以免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠腦內(nèi)TH的表達(dá)改變，采用分光光度法檢測(cè)大鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激參數(shù)（丙二醛和谷胱甘肽）的改變。

5、以電鏡方法觀察魚藤酮對(duì)大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.魚藤酮制備PD動(dòng)物模型:實(shí)驗(yàn)組大鼠隨機(jī)分為3組，分別每日皮下注射魚藤酮3.0mg/kg/day、2.0mg/kg/day以及1.0mg/kg/day。3.0mg/kg/day和2.0mg/kg/day兩組大鼠死亡率非常高;而組則死亡率較低，最后我們采用1.0mg/kg/day來作為我們實(shí)驗(yàn)組大鼠魚藤酮的用量，實(shí)驗(yàn)組的存活大鼠出現(xiàn)明顯的

6、行為學(xué)異常，如自主活動(dòng)減少、弓背屈曲等改變。
　　 2.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果:多巴胺(DA)能神經(jīng)元免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果:大鼠長(zhǎng)期注射魚藤酮后，對(duì)腦內(nèi)DA能神經(jīng)元有不同程度的損傷，表現(xiàn)為和對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組大鼠TH免疫反應(yīng)強(qiáng)度在黑質(zhì)和紋狀體都有明顯的降低;黑質(zhì)TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目明顯少于對(duì)照組(P＜0.01)。紋狀體的灰度值分析結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠TH表達(dá)量明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 3.

7、電鏡觀察結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元線粒體腫脹，樹突內(nèi)微管、微絲聚集，同時(shí)出現(xiàn)空泡樣改變。
　　 4.分光光度計(jì)法檢測(cè)PD大鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激參數(shù)谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)變化:分光光度計(jì)法檢測(cè)中腦黑質(zhì)中GSH和MDA二個(gè)氧化應(yīng)激參數(shù)的表達(dá)改變，GSH在實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯減低(P＜0.01)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，MDA在實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯增高(P＜0.01)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:本研究證實(shí)魚藤酮具有明顯的神經(jīng)毒