肝缺血-再灌注對(duì)大鼠腸道微生態(tài)狀況的影響及相關(guān)干預(yù)措施的作用.pdf

1、目的：肝缺血-再灌注是肝臟外傷、施行廣泛的肝葉切除、肝移植以及出血性休克等過程中不可避免的嚴(yán)重的臨床病理過程；腸道正常菌群構(gòu)成的腸道微生態(tài)環(huán)境與肝臟有著密切的聯(lián)系。本研究擬探討肝缺血-再灌注大鼠腸道微生態(tài)狀況的變化；應(yīng)用不同的益生菌制劑、中藥丹參等預(yù)處理，觀察其對(duì)腸道微生態(tài)狀況及肝損傷的影響；并對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行初步探討。 方法：采用無特殊病原體SD大鼠，用改良Pringlemaneuver法阻斷入肝血流20min，再灌注22h

2、造成肝缺血-再灌注模型。實(shí)驗(yàn)分四部分：第一部分動(dòng)物隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組(8只)假手術(shù)組(6只，只行假手術(shù))模型組(I/R組，10只，缺血20min，再灌注22h) 第二部分動(dòng)物隨機(jī)分為6組：對(duì)照組(假手術(shù)組，6只，每日給予4ml生理鹽水灌胃，連續(xù)7日)模型組(I/R組，10只，缺血20min，再灌注22h，每日給予4ml生理鹽水灌胃，連續(xù)7日)雙歧桿菌預(yù)處理組(BIF組，9只，每日給予1.2×109雙歧桿菌活菌懸液灌胃，連續(xù)

3、7日)乳酸桿菌預(yù)處理組(LACT組，9只，每日給予1.2×109乳酸桿菌活菌懸液灌胃，連續(xù)7日)雙歧桿菌/乳酸桿菌預(yù)處理組(BIF/LACT組，8只，每日給予雙歧桿菌及乳酸桿菌各1.2×109活菌懸液灌胃，連續(xù)7日)慶大霉素預(yù)處理組(7只，每日給予慶大霉素4u灌胃，連續(xù)7日)第三部分動(dòng)物隨機(jī)分為6組(同第二部分)第四部分動(dòng)物隨機(jī)分為3組：對(duì)照組(假手術(shù)組，6只，每日給予4ml生理鹽水灌胃，連續(xù)7日)模型組(I/R組，10只，缺血20mi

4、n，再灌注22h,每日給予4ml生理鹽水灌胃，連續(xù)7日)丹參預(yù)處理組(7只，每日給予4ml丹參粉溶液,250mg/kg灌胃，連續(xù)7日)各種預(yù)處理均于術(shù)前6日開始給藥，術(shù)后22h采集標(biāo)本用于分析各組回腸末段腸菌群構(gòu)成、腸道細(xì)菌易位情況、腸粘膜超微結(jié)構(gòu)、血漿內(nèi)毒素水平、血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、血清總膽紅素、肝組織病理學(xué)改變及肝組織中丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性。第三部分實(shí)驗(yàn)還對(duì)血清中腫瘤壞死因子-α、干擾素-γ、白細(xì)胞介素-

5、4進(jìn)行分析。 結(jié)果：改良Pringlemaneuver法所致肝缺血-再灌注大鼠血清ALT、AST明顯升高，血漿內(nèi)毒素水平及肝組織中MDA含量也增高；腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌組明顯減少，而腸球菌、腸桿菌卻增加，細(xì)菌易位至腎臟的陽(yáng)性率增加；腸粘膜細(xì)胞間隙增寬，微絨毛數(shù)受損。提示肝缺血-再灌注大鼠伴有腸道微生態(tài)的改變、腸粘膜屏障功能受損。給予雙歧桿菌或/和乳酸桿菌可使肝缺血-再灌注大鼠腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量明顯回升，腸粘膜超微結(jié)構(gòu)基

6、本正常，細(xì)菌易位至腎臟的陽(yáng)性率降低，肝功能亦明顯改善。慶大霉素組腸道多種菌數(shù)量明顯減少，但細(xì)菌易位率無明顯降低，肝功能改善亦不明顯。不同處理組腸道類桿菌、酵母菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量無顯著差異。提示補(bǔ)充益生菌——雙歧桿菌和乳酸桿菌可部分恢復(fù)肝缺血-再灌注時(shí)大鼠腸道菌群的構(gòu)成、改善腸粘膜屏障、減少腸道菌易位的發(fā)生率，進(jìn)而降低血漿內(nèi)毒素水平、減少肝臟氧自由基的產(chǎn)生、減輕肝損傷。 給予雙歧桿菌或/和乳酸桿菌可使肝缺血-再灌注大鼠血清腫瘤壞

7、死因子-α降低，但對(duì)血清干擾素-γ、白細(xì)胞介素-4水平無明顯影響。提示降低血清TNF-α水平是雙歧桿菌及乳酸桿菌減輕缺血-再灌注所致肝損傷的又一可能的機(jī)制，但并非唯一機(jī)制。給予丹參預(yù)處理可使肝缺血-再灌注大鼠腸道雙歧桿菌、類桿菌數(shù)量上明顯回升(與假手術(shù)組相似)，腸粘膜超微結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)菌易位至腎臟的陽(yáng)性率降低，血清ALT、血漿內(nèi)毒素水平及肝組織中MDA含量降低，SOD活性增高。不同處理組腸道乳酸桿菌、酵母菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量無顯著差異

8、。提示丹參可以部分恢復(fù)腸道微生態(tài)平衡，改善腸粘膜的完整性，降低細(xì)菌易位的發(fā)生率，降低血漿內(nèi)毒素水平。 結(jié)論：①肝缺血-再灌注大鼠存在著腸道菌群的失衡、腸粘膜屏障功能損害及腸道細(xì)菌易位；②補(bǔ)充雙歧桿菌和乳酸桿菌可部分恢復(fù)腸道菌群構(gòu)成、改善腸粘膜屏障、減輕肝損傷；③補(bǔ)充雙歧桿菌和乳酸桿菌可降低血清腫瘤壞死因子-α水平、減輕肝損傷；④丹參可改善肝缺血-再灌注大鼠腸道微生態(tài)平衡，改善腸粘膜的完整性，降低細(xì)菌易位的發(fā)生率，降低血漿內(nèi)毒素水