Tankyrasel反義寡核苷酸抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用的基礎(chǔ)研究.pdf

1、在腫瘤細(xì)胞和永生化細(xì)胞中,端粒酶介導(dǎo)的端粒延長(zhǎng)與端粒結(jié)合蛋白1(TRFl)對(duì)端粒長(zhǎng)度的負(fù)調(diào)控作用之間處于動(dòng)態(tài)平衡,使端粒維持在一特定長(zhǎng)度.近來(lái)發(fā)現(xiàn)一種新的端粒酶系統(tǒng)調(diào)控酶—端錨聚合酶1(Tankyrasel,TANKl),在細(xì)胞間期TANKl與TRFl結(jié)合共同定位于染色體末端,催化TRFl核糖基化而從端粒脫落,以便于端粒酶延伸端粒序列.該酶是調(diào)控端粒復(fù)制中最為明確的一環(huán),是細(xì)胞癌變機(jī)制和癌癥靶標(biāo)研究的新熱點(diǎn).國(guó)外的研究現(xiàn)狀為對(duì)TANKl

2、結(jié)構(gòu)及其細(xì)胞核內(nèi)、外定位功能方面的探討,少數(shù)學(xué)者報(bào)道了TANKl在某些惡性腫瘤中表達(dá)水平上調(diào),并與hTERT(人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶)的表達(dá)呈明顯正相關(guān).國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)僅限于對(duì)該酶相關(guān)功能的綜述性報(bào)道.國(guó)內(nèi)、外罕見(jiàn)TANKl反義核酸作用于惡性腫瘤研究的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道.該課題旨在探討TANKl反義寡核苷酸對(duì)人肺癌細(xì)胞系CALU增殖的影響.目的:探討TANKl反義寡核苷酸對(duì)人肺癌細(xì)胞系CALU增殖的抑制情況,為肺癌基因治療的靶標(biāo)研究探索新途徑.方法:設(shè)計(jì)

3、合成TANKl正義寡核苷酸(TANKl-SODN)、反義寡核苷酸(TANKl-ASODN),待人肺癌細(xì)胞株CALU裸鼠蹊部皮下接種成瘤后,將成瘤裸鼠隨機(jī)分成3組:對(duì)照組4只,正義組與反義組各5只.采用瘤體多位點(diǎn)注射的方法觀察實(shí)體瘤的生長(zhǎng)情況及腫瘤組織學(xué)、電鏡癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變;免疫組織化學(xué)SABC(鏈霉親和素-生物素-酶復(fù)合物)法檢測(cè)3組肺癌細(xì)胞中Ki67(細(xì)胞核增殖抗原)與hTERT蛋白的陽(yáng)性表達(dá)水平;hTERT TSP<'ZYME

4、D>原位雜交SABC染色系統(tǒng)檢測(cè)3組癌細(xì)胞中hTERT mRNA的陽(yáng)性表達(dá)情況.結(jié)論:1、人肺癌細(xì)胞系CALU中Ki67蛋白、hTERT蛋白及其mRNA呈高水平表達(dá),TANKl與hTERT表達(dá)異常增加可能是癌細(xì)胞增殖活躍的重要原因,這幾種基因的表達(dá)異?？赡茉诜伟┌l(fā)生及惡性進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用.2、TANKl-ASODN對(duì)裸鼠體內(nèi)的CALU肺癌細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用,可有效降低肺癌細(xì)胞中Ki67蛋白、hTERT蛋白及其mRNA的表