應用SPR生物傳感器快速檢測A型流感病毒研究.pdf

1、H5N1亞型高致病性禽流感嚴重威脅著人類及動物的健康。1997年香港H5N1禽流感病毒傳播到人事件的發(fā)生，更突出顯示了禽流感防治的公共衛(wèi)生意義?，F(xiàn)有的禽流感診斷方法主要包括病毒分離法、RT-PCR、NASBA、膠體金免疫層析技術(shù)等。每種診斷方法各有其優(yōu)點，但又受到幾個不利因素的限制，如成本高、處理周期長以及靈敏度低等，尤其在定量分析禽流感病毒含量及病毒亞型判定的即時、準確性方面尚需改進。本研究應用SPR生物傳感器實時監(jiān)測傳感器芯片表面發(fā)

2、生的抗原抗體結(jié)合/解離反應，具有快速、簡便、敏感、特異、成本低等特點，可作為現(xiàn)有禽流感診斷方法的有益補充，用于檢測采集樣品或雞胚尿囊液、細胞培養(yǎng)物中的禽流感病毒。
　　 本研究制備了一種檢測H5亞型流感病毒抗原的抗體芯片和一種檢測A型流感病毒抗原的抗體芯片，利用單通道單參數(shù)表面等離子體諧振生物傳感器對H5亞型禽流感病毒和A型流感病毒的快速檢測方法進行了研究，兩者都可以直接用于樣品的檢測。
　　 在快速檢測H5亞型流感病毒

3、研究中，分析比較了四種不同的檢測方法的檢測效果，以期獲得最靈敏、快速的檢測方法，這四種方法分別為蛋白A固定抗體檢測法、競爭抑制法、抗體夾心檢測法和直接檢測法。對試驗結(jié)果分析比較發(fā)現(xiàn)：將病毒樣品用1％ Triton X-100在室溫條件下裂解90 min后，采用直接檢測法較其它幾種方法更為快速。直接檢測法原理如下：抗H5N1亞型流感病毒血凝素（HA）單克隆抗體固定在傳感器芯片表面以捕獲樣品中病毒抗原片段，通過監(jiān)測反應過程中芯片表面折射率的

4、變化獲得相關(guān)抗原片段結(jié)合量數(shù)據(jù)，對數(shù)據(jù)進行分析后判定樣品中檢測物存在與否及含量。通過直接檢測法確立的H5亞型流感病毒的檢測范圍為5ng/mL-500ng/mL。對抗體芯片的特異性、穩(wěn)定性進行了研究，該抗體芯片對兩株H5N1亞型禽流感病毒具有特異的檢測效果，對雜蛋白無結(jié)合作用，與同為A型流感病毒的H9N2亞型無結(jié)合反應。
　　 在H5亞型流感病毒快速檢測方法建立基礎(chǔ)之上，本研究制備了檢測A型流感病毒的抗體芯片，并對A型流感病毒的快