紅花注射液對(duì)肺缺血再灌注損傷時(shí)細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因的影響.pdf

1、目的：探討細(xì)胞凋亡和肺缺血再灌注損傷的關(guān)系及紅花注射液對(duì)凋亡及其相關(guān)基因的影響。 方法：健康日本大耳白兔84只，隨機(jī)分成7組：對(duì)照組(C組)、缺血再灌注1h(IRlh)組、3h(IR3h)組、5h(IR5h)組、缺血再灌注+紅花注射液1h(S工1h)組、3h(S13h)組、5h(S15h)組。麻醉后左側(cè)開(kāi)胸，游離肺門(mén)，過(guò)阻斷帶，復(fù)制原位單肺缺血再灌注模型。C組為過(guò)阻斷帶后不結(jié)扎，觀察4h留置標(biāo)本；IR組為阻斷左肺門(mén)缺血Ih,然后

2、松開(kāi)阻斷帶分別再灌注1h、3h、5h留置標(biāo)本；SI組分別在缺血前20min及再灌注即刻靜脈注射紅花200mg／kg，其余同IR組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束取部分左肺組織測(cè)濕／干重比(W／D)；采用原位末端標(biāo)記法檢測(cè)肺組織凋亡指數(shù)(AI)；免疫組化學(xué)、原位雜交測(cè)定肺組織Bcl一2、Bax及caspase一3的表達(dá)；光鏡、電鏡下觀察肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，并測(cè)定肺損傷組織學(xué)定量評(píng)價(jià)指標(biāo)(IQA)。結(jié)果：1．IR各組w／D及IQA隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，且與C

3、組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(／KO．01)；SI各組與IR組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比明顯下降(均t2<0．01)。 2．IRlh組肺組織細(xì)胞AI明顯高于C組([K0．01)，IR3h組高于IRlh組(tK0．01)，IR5h組較IR3h組有增高的趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SI各組與IR組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比同樣明顯下降(均P<0．01)。凋亡細(xì)胞主要為肺泡上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。 3．IR各組肺組織Bcl一2和Bax的表達(dá)較C組明顯上調(diào)(均／2<0

4、．01)。陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺泡上皮細(xì)胞，少量表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞。IR組再灌注期間，Bax的表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加(P<0．05)；與IR組相同時(shí)間點(diǎn)比較S工組Bax的表達(dá)顯著下降(均F<0．01)。工R組隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)Bcl一2先升高而后下降(均P

5、(均P＜0．01)，SI各組與IR組同一時(shí)間點(diǎn)比較顯著下降(F

6、．01)；AI與Bcl一2／Bax蛋白、Bcl-2／BaxmRNA呈負(fù)相關(guān)(，分別=一O．367，一O．375；均P

7、完整。 7．透射電鏡檢查：IR組肺組織超微結(jié)構(gòu)的異常改變有，肺泡II型上皮細(xì)胞微絨毛脫落，板層小體疏松、排空，胞漿水腫，部分濃縮，核固縮；血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫，線粒體空泡樣變等。S工組肺組織上述損傷明顯減輕。 結(jié)論： 1．細(xì)胞凋亡可能在肺缺血再灌注損傷中起重要作用。 2．缺血再灌注可使Bax、caspase基因表達(dá)上調(diào)，Bcl一2基因表達(dá)下調(diào)，Bcl一2／Bax比例下降是促進(jìn)肺缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的重要因