精子成熟相關蛋白的研究.pdf

1、對于男性生殖或者受精而言，正常的精子是必要的條件。伴隨附睪內(nèi)轉(zhuǎn)運的過程，哺乳動物的精子會發(fā)生形態(tài)學、生化以及生理等方面的改變，特別是運動能力的獲得，因為無論是在女性生殖道內(nèi)朝向卵細胞的長途跋涉，還是后續(xù)的穿卵過程，都必須依賴精子的運動能力。 在我們的前期研究中，曾首次發(fā)現(xiàn)鋅a2糖蛋白（ZAG）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29（ERp29）前體都與精子的成熟相關。實驗結(jié)果顯示：人精漿中的ZAG可與a1抗胰蛋白酶相結(jié)合，進而激活附睪頭部不能運動的精

2、子向前運動。其次，通過高分辨率的二維電泳結(jié)合質(zhì)譜技術研究發(fā)現(xiàn)SD大鼠精子上存在ERp29前體蛋白，并證實該蛋白含量隨著精子在附睪內(nèi)的成熟過程而逐漸增加。 然而，人精子上是否含有ZAG，ZAG影響精子運動的機制如何；另外，對于ERp29前體而言，附睪精子上的是否屬于膜蛋白，而這種蛋白是否與附睪上皮的分泌相關，由此可見，這些問題目前還都尚待探究。 基于上述的問題，在本課題研究中，我們克隆表達了人類ZAG，并制備出相應的多克隆

3、抗體。然后運用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀檢測等技術在人精子上首次將ZAG蛋白得到了驗證并進行定位。此外，我們還發(fā)現(xiàn)該多克隆抗體能夠顯著抑制正常精液中上游精子的運動，并能同時降低精子胞內(nèi)cAMP和PKA水平。其次，SD大鼠附睪精子的ERp29前體蛋白被證實為精子膜蛋白，并且尾部精子的含量都比頭部的顯著增高。與此同時，免疫組化結(jié)果也顯示在附睪上皮組織中ERp29前體蛋白的表達量同樣是尾部高于頭部。 本研究課題對于ZAG和ERp29