以度魯特韋為基礎藥物的抗HIV-1體外藥效學研究及天然產物抗HIV-1作用機制和作用特點研究.pdf

1、高效抗逆轉錄病毒療法(Highly Active Antiretroviral Therapy, HAART)是艾滋病的常規(guī)治療方法，該方法采用一個基礎藥物與兩個核苷類逆轉錄酶抑制劑聯合應用。整合酶抑制劑通過抑制HIV逆轉錄生成的雙鏈DNA整合至宿主染色體發(fā)揮抗HIV活性，可作為基礎藥物使用。度魯特韋（Dolutegraver, DTG）是一種安全高效且具有較高基因屏障和良好藥代特性的整合酶抑制劑。本論文結合我國一線抗病毒治療方案，以野

2、生HIV-1、核苷類逆轉錄酶抑制劑耐藥HIV-1（HIV-1 RT-D67N,K70R,T215F）及整合酶抑制劑耐藥HIV-1（HIV-1IN-G140S,Q148H）重組病毒模型為代表，比較了以整合酶抑制劑DTG與非核苷類逆轉錄酶抑制劑依法韋倫(Efavirenz，EFV)和奈韋拉平(Nevirapine，NVP)作為基礎藥物聯合應用的體外藥效學;同時比較了DTG和同類藥物雷特格韋（Raltegravir, RAL）分別與兩個核苷類

3、逆轉錄酶抑制劑聯合應用的體外藥效學。結果顯示，以DTG為基礎藥物抑制野生HIV-1的藥效優(yōu)于非核苷類逆轉錄酶抑制劑，與RAL效果相當;對核苷類逆轉錄酶抑制劑耐藥HIV-1的藥效與非核苷類逆轉錄酶抑制劑相近;對整合酶抑制劑耐藥HIV-1的藥效優(yōu)于RAL。研究結果為臨床選擇藥物提供了參考。
　　盡管HAART顯著延長了艾滋病患者的生存期，但患者長期服藥后仍會由于耐藥病毒的出現或嚴重副作用而導致治療失敗，最終面臨無藥可用的困境，因此研發(fā)

4、更為安全有效的抗艾滋病藥物具有重要意義。本論文應用VSVG/HIV-1重組病毒篩選模型得到了兩類HIV-1復制抑制劑:丹參來源的化合物NPB524和NPB527，IC50分別為1.6 nmol·L-1和0.38μmol·L-1;雷公藤植物來源的化合物KET30、KET30C、KET31A和KET31C，IC50分別為5.27μmol·L-1、0.027μmol·L-1、6.04μmol·L-1和0.09μmol·L-1。
　　本論

5、文進一步研究了化合物NPB524和NPB527的抗HIV-1作用機制。首先，通過在病毒感染細胞后不同時間點加入化合物檢測半數失效時間實驗(TOA)可初步判斷化合物的作用環(huán)節(jié)，結果顯示化合物NPB524和NPB527在病毒感染細胞20h整個過程中皆有抑制活性。由于該重組病毒模型僅涉及HIV-1逆轉錄、整合和轉錄翻譯三個過程，提示這兩個化合物可能作用于病毒復制的靠后環(huán)節(jié)即轉錄翻譯環(huán)節(jié)，同時也不排除多環(huán)節(jié)阻斷病毒復制或影響了宿主因素的可能性。

6、其次，應用ELISA和熒光素法測定了化合物對逆轉酶RNA依賴的DNA聚合酶活性(RNAdependent DNA polymerase，RDDP)和RNase H活性的影響。結果顯示，NPB524和NPB527皆能劑量依賴地抑制逆轉錄酶RDDP活性(IC50:70.6μmol·L-1和63.5μmol·L-1)和RNase H活性（IC50:49μmol·L-1和26.2μmol·L-1），為逆轉錄酶雙重酶活性抑制劑。綜合分析，NPB5

7、24和NPB527除作用于病毒逆轉錄酶，可能還存在其他作用靶點。
　　本研究還應用臨床常見非核苷類逆轉錄酶抑制劑耐藥毒株(HIV-1RT-K103N和HIV-1RT-Y181C)在細胞和酶水平研究了活性化合物的作用特點。結果顯示，NPB524對這兩種耐藥毒株的抑制活性與野生型相近，優(yōu)于奈韋拉平。酶學實驗結果顯示NPB524對Y181C突變逆轉錄酶酶活性無抑制作用，提示NPB524除作用于病毒逆轉錄酶，還存在其他作用靶點。另外，NP