野木瓜多糖分離鑒定及其對血小板聚集和血栓形成影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：從貴州省遵義市正安縣產(chǎn)野木瓜中提取并純化野木瓜多糖(Stauntonia Chinensis Polysaccharides，SCP)，對其特征進(jìn)行初步研究，以體內(nèi)、外模型觀察SCP對血小板聚集和釋放、血栓形成的影響，為野木瓜的進(jìn)一步研發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料。
　　 方法：1、用水提醇沉法提取純化SCP；苯酚-硫酸法測定野木瓜中多糖含量：紅外光譜分析其結(jié)構(gòu)特征，HPLC測定單糖組成；DEAE-Sepharose fast fl

2、ow分析糖樣的電荷分布；Sepharose CL-6B柱層析測定分子量分布。2、以born's比濁法測定SCP對膠原，ADP，花生四烯酸(AA)和凝血酶(Thr)誘導(dǎo)的家兔血小板聚集的影響。3、用熒光分光光度法測定SCP對膠原誘導(dǎo)的血小板中5-HT含量的影響。4、用丙二醛試劑盒測定血小板中丙二醛含量(Maleic Dialdehyde，MDA)。5、測定血小板的HTCT(heparin thrombinclotting time，肝素凝

3、血酶凝固時間)反映血小板4因子(platelet factor4，PF4)的生物活性。6、給小鼠灌胃SCP1h后，經(jīng)小鼠尾靜脈注射膠原蛋白-腎上腺素混合誘導(dǎo)劑，誘發(fā)小鼠血栓性偏癱和死亡。觀察注射混合誘導(dǎo)劑后5min內(nèi)小鼠死亡數(shù)。
　　 結(jié)果：1.100g野木瓜粉末通過90℃熱水煮提，95%乙醇沉淀得到粗多糖，經(jīng)重新溶解、Sevag法脫蛋白得到SCP3.40g，得率為3.4%。SCP為米黃色粉末狀固體，溶于水，不溶于乙醇、丙酮和乙

4、醚等有機(jī)溶劑，其水溶液呈粘稠狀，pH弱酸性，Molish反應(yīng)出現(xiàn)紫色環(huán)呈陽性。紅外吸收光譜分析結(jié)果證明所提取的SCP為含甲酯化糖醛酸的多糖類物質(zhì)。SCP糖含量為51.6%，其單糖組成主要是半乳糖醛酸，甘露糖，葡萄糖醛酸，比例為46.3：18.5：10.3。同時也檢測到少量的葡萄糖，半乳糖和阿拉伯糖。電荷分布測定表明SCP是中性糖和酸性糖的混合物。其分子量是588.869Kd。2.SCP17mg/mL，34mg/mL和67mg/mL對膠原

5、，ADP和凝血酶誘導(dǎo)的家兔體外血小板聚集有抑制作用(P<0.05)。SCP34mg/mL，67 mg/mL對AA誘導(dǎo)的兔血小板聚集有明顯的抑制作用(P<0.01)，17mg/mLSCP對從誘導(dǎo)的兔血小板聚集無明顯的抑制作用(P>0.05)。3.SCP20mg/mL，40 mg/mL和80 mg/mL可降低膠原作用后血小板5-HT的含量，SCP17 mg/mL，34 mg/mL和67 mg/mL可降低凝血酶作用后血小板中MDA含量(P<0

6、.05)并且能使以膠原作為聚集誘導(dǎo)劑的HTCT延長。4.SCP300mg/kg，600mg/kg給小鼠灌胃后，與生理鹽水組比較，能降低膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)血栓形成所致的小鼠死亡率，提高恢復(fù)率，并呈劑量依賴性；SCP150mg/kg對小鼠恢復(fù)率的提高無明顯作用(P>0.05)。
　　 結(jié)論：SCP可以抑制由膠原、AA、ADP和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集，其作用機(jī)制與抑制血小板釋放5-HT和PF4有關(guān)，也與減少凝血酶引起的MD