甘草黃酮抗肺部炎癥的實驗研究.pdf

1、甘草系豆科多年生草本植物，主要含有甘草酸、甘草次酸、黃酮、生物堿和氨基酸等化學(xué)成分。甘草黃酮具有廣泛的藥理活性，包括抗氧化、抗腫瘤、抗HIV、抗?jié)儭⒈８蔚茸饔?。前期的研究證明甘草黃酮對辣椒素引起的豚鼠咳嗽反射有很強的抑制作用，我們推測其鎮(zhèn)咳作用機制與抗炎效應(yīng)有關(guān)。甘草黃酮對肺部炎癥的實驗研究至今未見報道，本研究采用內(nèi)毒素脂多糖誘導(dǎo)的小鼠肺部炎癥模型探討了甘草黃酮的抗炎作用，并研究了其抗炎作用機制。主要內(nèi)容如下：
　　 ⑴對支氣

2、管肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)的影響小鼠氣道內(nèi)滴入LPS24 h后，模型組BALF中的白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)目顯著上升。白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞與對照組比較分別增加了8.6倍和515倍(P<0.001)，淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞與對照組比較也有明顯差異(P<0.01)。與LPS(模型)組比較，甘草黃酮3、10、30 mg·kg-1+LPS組和DXM1 mg·kg-1+LPS組均能顯著

3、抑制BALF中的白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)目顯著增加。
　　 ⑵對肺水含量的影響對照組肺水含量為32.95±3.27％，模型組為39.48±2.06％，與對照組比較(P<0.01)；甘草黃酮3 mg·kg-1組為36.25±2.74％，與模型組比較(P<0.05)；10 mg·kg-1組為36.77±1.83％(P<0.05)；30 mg·kg-1組為35.06±4.61％(P<0.05)；DXM1 mg·kg

4、-1為33.47±4.51％(P<0.01)。
　　 ⑶對BALF中中性粒細(xì)胞髓過氧化酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量的影響小鼠氣道內(nèi)滴入LPS24 h后，模型組BALF中的SOD活力單位明顯下降，肺組織中的MPO活力單位明顯升高(P<0.05)。與LPS(模型)組比較，甘草黃酮3、10、30 mg·kg-1+LPS組和DXM1 mg·kg-1+LPS組均能顯著提高BALF中的SOD活力單位，顯著減少肺組織中的MPO

5、活力單位。
　　 ⑷對肺組織勻漿中腫瘤壞死因子-α(TNF-α) mRNA和白介素-1β(IL-1β) mRNA表達影響小鼠氣道內(nèi)滴入LPS6h或24 h后取肺組織，勻漿后測定TNF-α mRNA和IL-1βmRNA表達。滴入LPS6 h的TNF-α mRNA和IL-1βmRNA表達水平高于24 h。滴入LPS6h的TNF-αmRNA與對照組比較有明顯差異(P<0.01)，24 h的TNF-α mRNA與對照組比較無明顯差異(P

6、>0.05)。滴入LPS6h或24 h的IL-1βmRNA表達與對照組比較均有明顯差異(P<0.05)。甘草黃酮30 mg·kg-1能明顯抑制滴入LPS6h或24 h的IL-1β mRNA表達(P<0.05]，也能明顯抑制滴入LPS6h的TNF-αmRNA表達(P<0.01)，但對24 h的TNF-αmRNA表達無作用。DXM1mg·kg-1僅對6h的TNF-αmRNA和IL-1βmRNA表達有明顯作用(P<0.05)，對24 h的兩個

7、細(xì)胞因子表達均無明顯影響。
　　 ⑸對LPS氣管內(nèi)滴入2小時后的肺組織和BALF中TNF-α蛋白水平上升的抑制作用小鼠氣道內(nèi)滴入LPS2 h后支氣管肺泡灌洗和取肺組織，離心和勻漿后用ELIESA法測定TNF-α蛋白水平。結(jié)果顯示滴入LPS2 h的TNF-α蛋白水平與對照組比較有明顯差異(P<0.001).甘草黃酮10、30 mg·kg-1能明顯抑制滴入LPS2 h TNF-α蛋白水平，陽性對照藥地塞米松1 mg·kg-1也有明顯

8、抑制作用。
　　 ⑹對肺組織病理變化的影響氣道內(nèi)滴入LPS24 h后，模型組小鼠肺組織間隙可見大量的紅細(xì)胞滲出和中性粒細(xì)胞浸潤，肺泡破壞嚴(yán)重，肺泡間隙結(jié)構(gòu)增寬，有透明膜存在，水腫現(xiàn)象明顯。甘草黃酮10、30mg·kg-1和DXM1 mg·kg-1能明顯改善這些病理變化，甘草黃酮1 mg·kg-1作用不明顯。
　　 ⑺甘草黃酮能改善LPS引起的小鼠肺部炎癥，其抗炎作用可能與抑制細(xì)胞因子的表達和調(diào)節(jié)氧化/抗氧化反應(yīng)有關(guān)。

9、r>　　 ⑻CSE誘導(dǎo)NCI-H292、A549和HCC-827細(xì)胞毒反應(yīng)CSE呈濃度依賴誘導(dǎo)NCI-H292、A549和HCC-827細(xì)胞毒反應(yīng)和減少細(xì)胞的存活率。在三個細(xì)胞株中，CSE對NCI-H292細(xì)胞株最敏感。此外，該細(xì)胞株為人小氣道上皮細(xì)胞株，在傳代生長過程增殖較快。
　　 ⑼CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞毒反應(yīng)的時效和量效關(guān)系 CSE1.25％～10.0％呈濃度依賴誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞死亡，在培養(yǎng)的24～72

10、小時之間，隨時間的延長細(xì)胞死亡率增加。
　　 ⑽甘草黃酮(LF)對NCI-H292細(xì)胞存活率的影響 LF(0.005～5μg/ml)對NCI-H292細(xì)胞存活率無明顯影響。
　　 ⑾甘草苷芹糖(LA)對NCI-H292細(xì)胞存活率的影響低濃度LA(10-10～10-6M)對NCI-H292細(xì)胞存活率無明顯影響。當(dāng)LA濃度達到10-5～104M培養(yǎng)24h時，可見明顯的細(xì)胞毒作用。繼續(xù)培養(yǎng)24h或48h，這種細(xì)胞毒作用漸退，可

11、見高濃度LA的細(xì)胞毒作用是輕度和可恢復(fù)的。
　　 ⑿甘草黃酮(LF)對CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞毒的保護作用LF(5μg/ml)對CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞毒有明顯的保護作用，但當(dāng)LF濃度在0.005～0.5μg/ml時無明顯作用。
　　 ⒀甘草苷芹糖(LA)對CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞毒的影響當(dāng)LA濃度達到107～10-6M時，可明顯增強CSE誘導(dǎo)的細(xì)胞毒反應(yīng)(P<0.05～0.01)。當(dāng)LA濃度在10-1

12、0～10-8M時，對CSE誘導(dǎo)的細(xì)胞毒反應(yīng)不明顯(P>0.05)
　　 ⒁CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞IL-8和MUC5AC mRNA表達的時效和量效關(guān)系2.5％CSE濃度暴露NCI-H292細(xì)胞6h和24h可明顯誘導(dǎo)IL-8mRNA表達(P<0.05～0.01)，而1.25％CSE暴露NCI-H292細(xì)胞24h不能明顯誘導(dǎo)IL-8mRNA表達，2.5％CSE濃度暴露NCI-H292細(xì)胞1h和3h也不能明顯誘導(dǎo)IL-8mRNA

13、表達，提示CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞IL-8 mRNA表達呈時效和量效關(guān)系。同樣，2.5％CSE濃度暴露NCI-H292細(xì)胞24h可明顯誘導(dǎo)MUC5AC mRNA表達(P<0.05)，而1.25％CSE暴露NCI-H292細(xì)胞24h不能明顯誘導(dǎo)MUC5AC mRNA表達，2.5％CSE濃度暴露NCI-H292細(xì)胞1h、3h和6h也不能明顯誘導(dǎo)IL-8mRNA表達，提示CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞MUC5AC mRNA表達呈時效和量

14、效關(guān)系。
　　 ⒂LF對CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞IL-8 mRNA和MUC5AC mRNA表達的影響2.5％CSE濃度暴露NCI-H292細(xì)胞24h可明顯誘導(dǎo)IL-8mRNA表達(P<0.01)，LF0.5和5μg/ml預(yù)處理，與不處理的樣本比較，顯示明顯的抑制作用(P<0.05)，陽性對照地塞米松1μM處理后顯示很強的抑制作用(P<0.05)。同樣，LF0.5μg/ml預(yù)處理，與不處理的樣本比較，對2.5％CSE濃度暴露

15、NCI-H292細(xì)胞24h誘導(dǎo)的MUC5AC mRNA表達顯示明顯的抑制作用(P<0.05)。
　　 ⒃LA對CSE誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞IL-8 mRNA和MUC5AC mRNA表達的影響2.5％CSE濃度暴露NCI-H292細(xì)胞24h可明顯誘導(dǎo)IL-8mRNA表達(P<0.05)，LA1和10μM預(yù)處理，與不處理的樣本比較，無明顯的抑制作用(P>0.05).同樣，LA1和10μM預(yù)處理，與不處理的樣本比較，對2.5％CSE