Pit-1 siRNA對(duì)大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞遷移與侵襲行為的影響.pdf

1、目的：利用體外化學(xué)合成siRNA技術(shù)沉默pit-1基因的表達(dá)，研究其對(duì)大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞遷移和侵襲性的影響，為侵襲性垂體瘤的發(fā)病機(jī)制基因治療提供實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。
　　方法：根據(jù)大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞的pit-1基因序列，設(shè)計(jì)合成pit-1-siRNA及隨機(jī)陰性對(duì)照siRNA NC。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pit-1-siRNA經(jīng)LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞24h后，應(yīng)用Western blot、RT-P

2、CR檢測(cè)pit-1在大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞中的蛋白及mRNA的表達(dá)變化，進(jìn)而檢驗(yàn)pit-1基因的沉默效果。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pit-1-siRNA對(duì)GH3細(xì)胞遷移能力的影響。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pit-1-siRNA對(duì)GH3細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：pit-1-siRNA成功轉(zhuǎn)染大鼠垂體腺瘤GH3細(xì)胞24h后，pit-1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平明顯低于陰性對(duì)照組(P<0.05)。與對(duì)照組相

3、比，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示：pit-1-siRNA組細(xì)胞遷移能力較陰性對(duì)照組明顯降低(P<0.05)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示：與陰性對(duì)照組相比，pit-1-siRNA組穿過Matrigel基質(zhì)膠及濾膜的細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.05)。
　　結(jié)論：利用體外化學(xué)合成siRNA技術(shù)沉默pit-1基因可以降低大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞pit-1的表達(dá)，抑制GH3細(xì)胞的遷移及侵襲能力，pit-1在大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞