Mac-1-FP融合蛋白的構(gòu)建、表達(dá)、鑒定及其在細(xì)胞內(nèi)走向的探討.pdf

1、Mac-1（CD11b/CD18）為位于白細(xì)胞表面的整合素家族粘附分子之一,它是白細(xì)胞游走、趨化、吞噬的基礎(chǔ),在機(jī)體防御作用及免疫反應(yīng)過(guò)程中起著極為重要的作用.然而,迄今為止,盡管白細(xì)胞活化后Mac-1如何參與粘附的研究已相當(dāng)深入,但關(guān)于Mac-1在白細(xì)胞脫粘附中的作用及其機(jī)制則研究得還很少;對(duì)于Mac-1的貯存、轉(zhuǎn)位、變構(gòu)的過(guò)程,尚缺乏在一個(gè)細(xì)胞對(duì)其全過(guò)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)定位定量的研究;對(duì)不同的激動(dòng)劑引起的Mac-1的活化過(guò)程,還只是一個(gè)統(tǒng)一

2、的籠統(tǒng)的模式.為此,該課題擬對(duì)Mac-1在細(xì)胞內(nèi)的走向進(jìn)行研究.以往文獻(xiàn)上研究Mac-1的貯存、轉(zhuǎn)位以及內(nèi)吞的方法,主要采用的是抗體標(biāo)記Mac-1,用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定或免疫組化技術(shù)顯微鏡下直接觀察Mac-1的細(xì)胞內(nèi)分布,但其缺點(diǎn)是不可能在單細(xì)胞、活細(xì)胞連續(xù)地觀察,如果要研究在細(xì)胞內(nèi)的走向則還需要使細(xì)胞表面通透性增高（permeabilize）,這就難免干擾了細(xì)胞的靜態(tài)及生理過(guò)程.我們決定嘗試采用綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記Mac-1形成融合