金邊瑞香活性成分瑞香素對(duì)CIA的治療及Th17細(xì)胞調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、目的:觀察金邊瑞香活性成分瑞香素對(duì)膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(collagenⅡ-induced arthritis,CIA)大鼠的抑制作用,探討金邊瑞香活性成分瑞香素對(duì)CIA中Th17細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用,為研制RA的新藥提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:1.動(dòng)物分組選用健康雌性SPF級(jí)Wistar大鼠48只,體重170g±10g,隨機(jī)分為健康對(duì)照組、CIA模型組、瑞香素高、中、低劑量治療組及CIA陽(yáng)性對(duì)照組共6組,每組8只:2.建立CIA模

2、型將牛Ⅱ型膠原蛋白溶于0.5mol/L醋酸中,加入等量弗氏不完全佐劑乳化配成濃度為0.25mg/mL的Ⅱ型膠原蛋白乳劑,于左足底皮內(nèi)注射0.1mL,21天后同法加強(qiáng)免疫1次;3.藥物治療于第一次免疫的第20天開(kāi)始用藥治療,瑞香素高、中、低治療組分別采取4、2、1mg/kg.d的瑞香素腹腔注射,CIA陽(yáng)性對(duì)照組采用0.4mg/kg.d的雷公藤甲素腹腔注射;CIA模型組和健康對(duì)照組則注射等量的無(wú)菌生理鹽水,治療21天;4.檢測(cè)如下指標(biāo):(1

3、)測(cè)量各實(shí)驗(yàn)組鼠體重;(2)采用YLS-7B足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量各實(shí)驗(yàn)組鼠免疫足足趾的體積,計(jì)算腫脹率;(3)采用PLANMECA TNTRA X線攝片機(jī)對(duì)各實(shí)驗(yàn)組鼠免疫足進(jìn)行X線拍攝,以觀察各組大鼠關(guān)節(jié)局部病變;(4)采用病理組織學(xué)H-E染色分析各實(shí)驗(yàn)組鼠關(guān)節(jié)局部病變程度:(5)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組鼠脾T淋巴細(xì)胞內(nèi)RORγt、Foxp3、TGF-β、IL-6、IL-4、IFN-γ和NF-kB水平。
　　 結(jié)果:1.健康對(duì)照

4、組、CIA模型組、CIA陽(yáng)性對(duì)照組、及瑞香素高、中、低劑量組大鼠經(jīng)治療21天后平均體重(g)分別為191.00±6.78、189.38±6.12、193.5±10.10、187.11±6.09、194.50±10.92、195.00±7.59;各組間比較,平均體重均無(wú)顯著性差異(P＞0.05);2.經(jīng)金邊瑞香素治療后,金邊瑞香素高、中、低劑量組大鼠在第24天至第40天免疫足腫脹率均顯著低于CIA模型組(P＜0.05);金邊瑞香素高、中、

5、低劑量組大鼠在第24天至第40天與CIA陽(yáng)性對(duì)照組比較,免疫足腫脹率無(wú)顯著性差異(P＞0.05);3.X線顯示金邊瑞香素高、中、低劑量組鼠免疫足軟組織輕度腫脹,關(guān)節(jié)稍增粗,關(guān)節(jié)間隙明顯,骨關(guān)節(jié)邊緣界限清晰,而CIA模型組免疫足X線表現(xiàn)軟組織腫脹明顯,關(guān)節(jié)增粗,關(guān)節(jié)間隙變窄,骨關(guān)節(jié)邊緣模糊不清;4.H-E染色后金邊瑞香素高、中、低劑量組鼠滑膜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)可見(jiàn)輕度破壞,關(guān)節(jié)間隙輕度狹窄,但關(guān)節(jié)軟骨表面較完整,未見(jiàn)明顯滑膜細(xì)胞增生,有少量炎性細(xì)胞

6、浸潤(rùn),但未見(jiàn)纖維組織增生和血管翳形成;而CIA模型組則顯示滑膜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)明顯破壞,關(guān)節(jié)間隙狹窄,關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體積增大甚至軟骨表面被破壞,可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維組織增生,可見(jiàn)血管翳侵蝕關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨等組織引致骨關(guān)節(jié)軟骨破壞、軟骨下骨溶解;5.金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T淋巴細(xì)胞內(nèi)RORγt和IL-6水平低于CIA模型組,差異有顯著性(P＜0.05),但與CIA陽(yáng)性對(duì)照組比無(wú)顯著性差異(P＞0.05);金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T

7、淋巴細(xì)胞內(nèi)Foxp3水平高于CIA模型組和CIA陽(yáng)性對(duì)照組(P＜0.05):金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T淋巴細(xì)胞內(nèi)TGF-β水平低于CIA模型組和CIA陽(yáng)性對(duì)照組,差異均有顯著性(P＜0.05),而與健康對(duì)照組比均無(wú)顯著性差異(P＞0.05);金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T淋巴細(xì)胞內(nèi)IL-4水平低于CIA模型組和CIA陽(yáng)性對(duì)照組,差異均有顯著性(P＜0.05);金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T淋巴細(xì)胞內(nèi)IFN-γ水平低于CIA模型組,差

8、異有顯著性(P＜0.05),其中高劑量組與CIA陽(yáng)性對(duì)照組比無(wú)顯著性差異(P＞0.05);各實(shí)驗(yàn)組間大鼠脾T淋巴細(xì)胞內(nèi)NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞百分率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:1.金邊瑞香素對(duì)Wistar大鼠體重?zé)o明顯影響;2.金邊瑞香素在1～4mg/kg.d范圍內(nèi)對(duì)CIA大鼠足腫脹有較明顯的抑制作用;3.金邊瑞香素有助于改善CIA大鼠關(guān)節(jié)局部病變程度;4.金邊瑞香素可通過(guò)降低CIA大鼠脾T淋巴細(xì)胞內(nèi)RORγt、TGF