規(guī)?；i場(chǎng)PRRSV血清馴化與疫苗免疫實(shí)際應(yīng)用效果對(duì)比研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合癥對(duì)養(yǎng)豬業(yè)來(lái)說(shuō)仍然是一個(gè)巨大的威脅，因其給全世界養(yǎng)豬經(jīng)濟(jì)造成不可估量的損失，因此該病的防控對(duì)養(yǎng)豬業(yè)來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。
　　(1)本研究通過(guò)對(duì)規(guī)模場(chǎng)各個(gè)階段豬的抗PRRSV N蛋白抗體進(jìn)行普查，發(fā)現(xiàn)12周齡的育肥豬群的抗PRRSV N蛋白抗體由原來(lái)的陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，從該豬群中選出有發(fā)燒、食欲不振等癥狀的豬進(jìn)行采集血清和解剖采集組織，血清和組織樣品經(jīng)RT-PCR方法檢測(cè)病原，結(jié)果為繁殖與呼吸綜合征病毒陽(yáng)性，豬瘟、乙腦為陰性，

2、通過(guò)PCR檢測(cè)出豬偽狂犬、圓環(huán)、副豬嗜血桿菌為陰性。
　　(2)對(duì)檢測(cè)為PRRSV陽(yáng)性的樣品進(jìn)行ORF5基因測(cè)序，結(jié)果表明，本研究所獲得的A-1、A-3的ORF5核苷酸序列均分布于美洲型毒株的分支上，表明它們均為美洲型PRRSV。且A-1和A-3與VR-2332的毒株處于同一亞支上，屬于VR-2332-like亞型。A-1、A-3ORF5基因核苷酸和推導(dǎo)編碼氨基酸序列的同源性為分別為99.8％和100％;與已登錄在NCBI上部分參

3、考序列相應(yīng)氨基酸同源性為56.6-99.0％，與美洲型代表毒株VR-2332的相應(yīng)氨基酸同源性最高，為98.5％，與中國(guó)第一分離株CH-1a的相應(yīng)氨基酸同源性為90.0％，與HP-RRSV代表毒株JXA1和HUN4株的相應(yīng)氨基酸同源性分別為86.5％，87.0％?；贠RF5基因構(gòu)建的遺傳進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果表明:A1、A3均分布于美洲型毒株的分支上，表明它們均為美洲型PRRSV。且A-1和A-3與VR-2332的毒株處于同一亞支上，為VR-2

4、332-like亞型。說(shuō)明該場(chǎng)只流行一種血清型毒株，適合做血清馴化。
　　(3)本研究通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)確定PRRSV陽(yáng)性血清感染豬的最佳途徑為噴鼻。用肌注、噴鼻、肌注+噴鼻三個(gè)不同的感染途徑來(lái)感染保育豬，結(jié)果表明:肌肉注射的方式感染保育豬，保育豬臨床癥狀輕微，在血清中幾乎檢測(cè)不到病原;肌肉注射加噴鼻的方式感染試驗(yàn)豬后，試驗(yàn)豬表現(xiàn)出嚴(yán)重的臨床癥狀，高燒不退;噴鼻的方式感染感染試驗(yàn)豬，試驗(yàn)豬表現(xiàn)出發(fā)熱，食欲不振等臨床癥狀，但很快恢復(fù)正常，

5、且能在感染后的第一天就能檢測(cè)到PRRSV。用肌肉注射加噴鼻的方式感染的試驗(yàn)豬，在48小時(shí)內(nèi)體溫達(dá)到42℃，說(shuō)明此時(shí)的3號(hào)豬處于病毒血癥期，PRRSV正在體內(nèi)大量繁殖，剖殺3號(hào)豬，獲得了大量含PRRSV的陽(yáng)性血清。
　　(4)獲得的PRRSV陽(yáng)性血清用RT-PCR方法初步確定PRRSV陽(yáng)性血清的稀釋濃度為1∶120。將PRRSV陽(yáng)性血清按不同濃度稀釋后，檢出PRRSV的最小稀釋濃度為1∶1200，在此基礎(chǔ)上，假定檢出PRRSV的最小

6、稀釋濃度的10倍為血清馴化最佳濃度，即為1∶120。通過(guò)后備母豬的血清馴化預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明，用稀釋濃度為1∶120的PRRSV陽(yáng)性血清，通過(guò)噴鼻的方式感染后備母豬，能使豬體內(nèi)的抗PRRSV N蛋白抗體迅速提高，不出現(xiàn)排毒現(xiàn)象，且體溫?zé)o大波動(dòng)。說(shuō)明此次獲得的血清馴化的最佳稀釋濃度為1∶120，同時(shí)也說(shuō)明血清馴化的適用于后備母豬。
　　(5)通過(guò)對(duì)比血清馴化與疫苗免疫對(duì)后備母豬的影響結(jié)果表明，PRRSV陽(yáng)性血清馴化與疫苗免疫產(chǎn)生抗PRR