規(guī)?；i場PRRSV血清馴化與疫苗免疫實際應用效果對比研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合癥對養(yǎng)豬業(yè)來說仍然是一個巨大的威脅，因其給全世界養(yǎng)豬經濟造成不可估量的損失，因此該病的防控對養(yǎng)豬業(yè)來說至關重要。
　　(1)本研究通過對規(guī)模場各個階段豬的抗PRRSV N蛋白抗體進行普查，發(fā)現(xiàn)12周齡的育肥豬群的抗PRRSV N蛋白抗體由原來的陰性轉為陽性，從該豬群中選出有發(fā)燒、食欲不振等癥狀的豬進行采集血清和解剖采集組織，血清和組織樣品經RT-PCR方法檢測病原，結果為繁殖與呼吸綜合征病毒陽性，豬瘟、乙腦為陰性，

2、通過PCR檢測出豬偽狂犬、圓環(huán)、副豬嗜血桿菌為陰性。
　　(2)對檢測為PRRSV陽性的樣品進行ORF5基因測序，結果表明，本研究所獲得的A-1、A-3的ORF5核苷酸序列均分布于美洲型毒株的分支上，表明它們均為美洲型PRRSV。且A-1和A-3與VR-2332的毒株處于同一亞支上，屬于VR-2332-like亞型。A-1、A-3ORF5基因核苷酸和推導編碼氨基酸序列的同源性為分別為99.8％和100％;與已登錄在NCBI上部分參

3、考序列相應氨基酸同源性為56.6-99.0％，與美洲型代表毒株VR-2332的相應氨基酸同源性最高，為98.5％，與中國第一分離株CH-1a的相應氨基酸同源性為90.0％，與HP-RRSV代表毒株JXA1和HUN4株的相應氨基酸同源性分別為86.5％，87.0％?；贠RF5基因構建的遺傳進化樹，結果表明:A1、A3均分布于美洲型毒株的分支上，表明它們均為美洲型PRRSV。且A-1和A-3與VR-2332的毒株處于同一亞支上，為VR-2

4、332-like亞型。說明該場只流行一種血清型毒株，適合做血清馴化。
　　(3)本研究通過動物試驗確定PRRSV陽性血清感染豬的最佳途徑為噴鼻。用肌注、噴鼻、肌注+噴鼻三個不同的感染途徑來感染保育豬，結果表明:肌肉注射的方式感染保育豬，保育豬臨床癥狀輕微，在血清中幾乎檢測不到病原;肌肉注射加噴鼻的方式感染試驗豬后，試驗豬表現(xiàn)出嚴重的臨床癥狀，高燒不退;噴鼻的方式感染感染試驗豬，試驗豬表現(xiàn)出發(fā)熱，食欲不振等臨床癥狀，但很快恢復正常，

5、且能在感染后的第一天就能檢測到PRRSV。用肌肉注射加噴鼻的方式感染的試驗豬，在48小時內體溫達到42℃，說明此時的3號豬處于病毒血癥期，PRRSV正在體內大量繁殖，剖殺3號豬，獲得了大量含PRRSV的陽性血清。
　　(4)獲得的PRRSV陽性血清用RT-PCR方法初步確定PRRSV陽性血清的稀釋濃度為1∶120。將PRRSV陽性血清按不同濃度稀釋后，檢出PRRSV的最小稀釋濃度為1∶1200，在此基礎上，假定檢出PRRSV的最小

6、稀釋濃度的10倍為血清馴化最佳濃度，即為1∶120。通過后備母豬的血清馴化預試驗結果表明，用稀釋濃度為1∶120的PRRSV陽性血清，通過噴鼻的方式感染后備母豬，能使豬體內的抗PRRSV N蛋白抗體迅速提高，不出現(xiàn)排毒現(xiàn)象，且體溫無大波動。說明此次獲得的血清馴化的最佳稀釋濃度為1∶120，同時也說明血清馴化的適用于后備母豬。
　　(5)通過對比血清馴化與疫苗免疫對后備母豬的影響結果表明，PRRSV陽性血清馴化與疫苗免疫產生抗PRR