青春雙歧桿菌BA005抗逆性研究及其功能性應(yīng)用.pdf

1、本研究目的是從嬰兒糞便中分離出青春雙歧桿菌,經(jīng)過生化及分子鑒定后,對此分離菌株進行抗逆環(huán)境馴化及篩選,對篩選出的優(yōu)良菌株進行培養(yǎng)條件的優(yōu)化,從而滿足工業(yè)化生產(chǎn)的技術(shù)需求。為了確保其安全性,對該菌株進行毒理試驗,同時進行功能性測試,并開發(fā)益生菌相關(guān)應(yīng)用產(chǎn)品。
　　 分離得到的疑似目的菌株,通過特征酶及發(fā)酵糖試驗進行菌種屬的篩選,再進一步應(yīng)用分子生物學(xué)方法,提取菌株16S rDNA,通過基因序列的比對,對菌株進行種的鑒定。成功分離出

2、目的菌株——青春雙歧桿菌,通過發(fā)育樹系統(tǒng)命名為:Bifidobacteriumadolescentis BA005。
　　 通過無氧-有氧交替馴化的方法,篩選出耐氧能力較強的青春雙歧桿菌菌株,馴化后菌株的菌落形態(tài)和顯微鏡觀察狀態(tài)基本沒有改變,菌體生長速度較無氧培養(yǎng)時緩慢,生長曲線中對數(shù)生長期拖后,但對培養(yǎng)后的活菌數(shù)影響不大,有氧培養(yǎng)24h后活菌數(shù)可達到3.30×1010cfu/mL。
　　 為降低工業(yè)生產(chǎn)中的生產(chǎn)成本,本

3、研究采用玉米汁為培養(yǎng)基質(zhì),對耐氧Bifidobacterium adolescentis BA005進行培養(yǎng)條件響應(yīng)面法優(yōu)化。確定培養(yǎng)的最佳條件:接種量5％,玉米糖化液濃度12.1Bx,初始pH值6.48,培養(yǎng)溫度37℃,發(fā)酵時間20h。在此條件下菌液最大OD值為1.819,活菌數(shù)為3.05×1012cfu/mL。
　　 人工模擬人胃、腸道酸性及酶環(huán)境,對耐氧Bifidobacterium adolescentis BA005進

4、行抗胃腸道逆環(huán)境菌株篩選,并對常用抗生素耐性進行測試。結(jié)果表明,在模擬胃液環(huán)境中菌存活率為72.12％;在模擬腸道環(huán)境中菌存活率為53.33％;對大多數(shù)常用抗生素僅為中度敏感,對氨芐西林具有較強的耐藥性。證明此菌株可以發(fā)揮其保健作用,維持人體健康。
　　 對Bifidobacterium adolescentis BA005進行小鼠急性毒理試驗及短期(30天)喂養(yǎng)試驗,試驗劑量超過了人可能食用劑量的10倍,試驗小鼠沒有出現(xiàn)中毒或

5、死亡等異常狀況,解剖其內(nèi)臟主要器官,亦未見異常。從而證明此菌為安全菌株,可以放心食用并進行開發(fā)利用。
　　 通過藥物建造腹瀉和便秘小鼠模型,對模型小鼠給予不同種類的益生菌劑,通過比較,Bifidobacterium adolescentis BA005菌株對腹瀉和便秘癥狀的緩解和治療功效最強。
　　 基于青春雙歧桿菌的諸多功能性,對其進行新產(chǎn)品開發(fā)。產(chǎn)品之一為格瓦斯發(fā)酵飲料,通過雙歧桿菌和酵母菌的共同發(fā)酵,飲料中含有豐富