低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥對(duì)大鼠睪丸Cdc25A、cyclin B1及AR蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)采用大鼠喂服棉酚和甾體激素聯(lián)合用藥方式[棉酚12.5mg/（kg·d）+去氧孕烯125μg/（kg·d）+炔雌醇25μg/（kg·d）+十一酸睪丸酮100mg/（kg·d）]，與單獨(dú)喂服相同劑量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纖維素溶劑的大鼠相對(duì)照，通過(guò)免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡法，觀察Cdc25A、cyclin B1及AR蛋白表達(dá)的變化，進(jìn)而了解低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合應(yīng)用（棉甾聯(lián)合用藥）對(duì)大鼠睪丸Cdc25A、cyclin。B1及

2、AR蛋白表達(dá)的影響。
　　 Cdc25A免疫組織化學(xué)顯示，在從精原細(xì)胞轉(zhuǎn)變到前細(xì)線期精母細(xì)胞的過(guò)程中，Cdc25A的陽(yáng)性部位出現(xiàn)在細(xì)胞核；進(jìn)入粗線期精母細(xì)胞之后到雙線期精母細(xì)胞這一階段，Cdc25A的陽(yáng)性定位在細(xì)胞質(zhì)中；圓形精子細(xì)胞內(nèi)的Cdc25A主要集中在頂體部位表達(dá)。用藥6周時(shí)，棉甾聯(lián)合用藥組Cdc25A在頂體和間質(zhì)中的表達(dá)較對(duì)照組減弱，均有顯著性差異（P<0.05）；用藥8周和10周時(shí)，Cdc25A在同一時(shí)間點(diǎn)間質(zhì)和頂體的

3、表達(dá)趨勢(shì)與用藥6周時(shí)相同。用藥8周時(shí)，棉甾聯(lián)合用藥組Cdc25A在精母細(xì)胞中表達(dá)較對(duì)照組增強(qiáng)。Western blotting結(jié)果顯示，棉甾聯(lián)合用藥組大鼠睪丸組織的總蛋白中Cdc25A的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，與對(duì)照組的變化趨勢(shì)相反。
　　 Cyclin B1免疫組化結(jié)果顯示其主要定位在大鼠睪丸組織的間質(zhì)細(xì)胞和圓形精子細(xì)胞中。棉甾聯(lián)合用藥組中cyclin B1在間質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)量明顯降低（P<0.05），但在圓形精子細(xì)胞中的表達(dá)量沒(méi)有

4、明顯改變。Western blotting結(jié)果顯示，棉甾聯(lián)合用藥組大鼠睪丸組織總蛋白中cyclin B1的含量與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異。
　　 AR免疫組化結(jié)果顯示其定位于大鼠睪丸組織的細(xì)線期和偶線期精母細(xì)胞核、11期精子頭部以及間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)中。棉甾聯(lián)合用藥組間質(zhì)細(xì)胞的陽(yáng)性出現(xiàn)在細(xì)胞核。
　　 綜上所述，Cdc25A定位于正常大鼠睪丸精母細(xì)胞和圓形精子細(xì)胞的不同部位，表明其在精子發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用。Cdc25A在圓形精子

5、細(xì)胞頂體部位的大量表達(dá)提示Cdc25A與頂體的形成有關(guān)。低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥使Cdc25A在各部位的表達(dá)趨勢(shì)改變，說(shuō)明棉甾聯(lián)合用藥對(duì)精子發(fā)生減數(shù)分裂過(guò)程中Cdc25A功能的正常發(fā)揮產(chǎn)生潛在影響。Cyclin B1定位于大鼠睪丸組織的間質(zhì)細(xì)胞和圓形精子細(xì)胞中，棉甾聯(lián)合用藥組中cyclin B1的變化結(jié)果證實(shí)棉甾聯(lián)合用藥明顯影響間質(zhì)細(xì)胞的功能，而對(duì)精子發(fā)生過(guò)程中cyclin B1的功能發(fā)揮沒(méi)有產(chǎn)生直接影響。檢測(cè)AR的蛋白表達(dá)水平，發(fā)