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文檔簡介
1、本實驗采用大鼠喂服低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥(棉酚(G,Gossypol acetic acid)12.5mg/(kg·d)+去氧孕烯(DSG,Desogestrel)125μg/(kg·d)+炔雌醇(EE,Ethinyl estradiol)25μg/(kg·d)+十一酸睪丸酮(TU,Testosterone undecanoate)100mg/(kg·d))的方式,與單獨喂服相同劑量的棉酚或甾體激素的大鼠及喂服甲基纖維素溶劑的大鼠
2、相對照,通過TUNEL染色,觀察生精細胞凋亡的情況;通過免疫組織化學染色和免疫印跡,觀察誘導型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達的變化,以期發(fā)現(xiàn)iNOS在生精細胞凋亡中的作用;通過免疫組織化學染色和免疫印跡,觀察骨橋蛋白(OPN),這一細胞間連接分子的表達變化。 本實驗結果包括兩部分:生精細胞凋亡和iNOS蛋白表達的變化,OPN表達的變化。 TUNEL染色顯示,在正常對照組(C組),陽性著色主要分布在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管
3、的殘余體中,偶見于粗線期精母細胞中。棉甾聯(lián)合用藥組(GH組)和激素組(H組),陽性著色主要分布在粗線期精母細胞中,隨用藥時間的延長,陽性著色的細胞數(shù)量增多(P<0.01)。免疫組織化學染色顯示,在正常對照組,iNOS在殘余體、精原細胞和粗線期精母細胞中的表達具有期依賴性。在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管,iNOS主要在殘余體中表達;在Ⅸ—Ⅻ期生精小管,精原細胞和粗線期精母細胞的核中可見少量表達。在棉甾聯(lián)合用藥組,iNOS在殘余體中的表達,隨用藥時
4、間的延長表達量降低(P<0.05);iNOS在粗線期精母細胞、精原細胞細胞細胞核中的表達,隨用藥時間的延長表達量增高(P<0.05)。iNOS在正常對照組的間質細胞中持續(xù)表達,棉甾聯(lián)合用藥組4周降至最低,4,6和8周表達量無統(tǒng)計學差別。本試驗提示:iNOS蛋白在低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合應用大鼠睪丸中各部位的表達變化趨勢不一致,分別產(chǎn)生不同的功能;凋亡的生精細胞數(shù)量增加,可能與iNOS的表達增多有關。 免疫組織化學染色顯示,在正常
5、對照組,OPN陽性著色主要分布在間質細胞的細胞質,強表達;在基底部細胞連接處,精原細胞、前細線期精母細胞、細線期精母細胞、支持細胞細胞質、精子細胞項體部、各級生殖細胞與支持細胞連接處,都有表達。棉酚組(G組)OPN的表達與對照組相似。棉甾聯(lián)合用藥和激素組中,OPN的表達變化趨勢相似,表達位置與對照組同。OPN在間質細胞細胞質中的表達,隨用藥時間的延長表達量降低(P<0.05);在基底細胞連接處的表達隨用藥時間的延長表達量增強;在各級生精
6、細胞與支持細胞連接處的表達,隨用藥時間的延長表達量呈先增高后降低的趨勢。免疫印跡的結果顯示,對照組各時間點OPN的表達量基本一致,棉酚組OPN蛋白表達與對照組相似。激素組和棉甾聯(lián)合用藥組表達量呈增強趨勢,特別是棉甾聯(lián)合用藥組,在4、6周時表達量很低,8周較前增強明顯。 綜上所述,棉甾聯(lián)合用藥抗生育過程中會引起生精細胞凋亡增多,可能與iNOS蛋白表達的增多有關。OPN作為一種細胞外連接分子,隨用藥時間的延長,在其底部細胞連接處表達
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