宇佐美曲霉phyA基因的克隆與表達(dá).pdf

1、植酸酶(phytase，phyA)是催化植酸及其鹽類物質(zhì)水解成肌醇和磷酸的一類酶的總稱。它能促進(jìn)單胃動(dòng)物對(duì)磷的吸收；能使飼料中磷的利用率提高50％左右；同時(shí)它還能將與多種金屬離子和蛋白質(zhì)螯合的植酸磷降解；此外它還具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、保護(hù)生態(tài)環(huán)境等作用，因而在飼料、食品和醫(yī)藥工業(yè)以及環(huán)保等方面都具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值。 多種微生物如細(xì)菌、絲狀真菌、酵母等都能產(chǎn)生植酸酶，但由于很難找到一種產(chǎn)酶量很高的天然產(chǎn)植酸酶菌株和植酸

2、酶的熱穩(wěn)定性問(wèn)題一直不能得到很好的解決，所以目前植酸酶在飼料中并沒(méi)有得到廣泛的推廣和應(yīng)用。 本研究根據(jù)已發(fā)表的植酸酶phyA基因全序列設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物，用PCR方法從宇佐美曲霉總DNA中擴(kuò)增到去除信號(hào)肽和內(nèi)含子后約1.3kb的phyA基因編碼區(qū)片段，對(duì)該片段進(jìn)行了克隆及序列測(cè)定。通過(guò)選用功能強(qiáng)大的原核表達(dá)載體pET32a+和真核表達(dá)載體pMETαA，構(gòu)建了Ecoli.BL21-pET32a+-phyA表達(dá)載體和酵母PMAD16-p