慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞和肝組織內性甾體激素受體與肝組織病理狀態(tài)的相關性.pdf

1、研究目的:
　　探討慢性乙型肝炎肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與肝組織病理學狀態(tài)和肝組織HBsAg、 HBcAg表達強度之間的相關性。
　　研究方法:
　　1、研究對象
　　1.1、入選標準:參照2010年中華醫(yī)學會肝病學分會制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》中的診斷標準，選取經過肝穿刺活檢的慢性乙型肝炎患者162例，性別與年齡不限。
　　1.2、排除標準:
　　(1)合

2、并酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、丙型肝炎、藥物性肝炎、自身免疫性肝病、膽汁淤積性肝病、淤血性肝病、肝豆狀核變性、血色病及其他非乙肝病毒感染導致的肝病;
　　(2)近半年內曾經使用激素替代藥物、或激素拮抗藥物、或抗肝纖維化藥物的患者;
　　(3)肝硬化失代償期患者;
　　(4)性腺疾病、內分泌與其他可能影響體內睪酮、雌二醇疾病的患者。
　　2、標本采集與保存
　　2.1、肝穿組織標本采集與保存:肝組織活檢采

3、用1秒鐘經皮肝穿刺法。肝組織標本采集后分成兩段，長度分別≥1.0cm和≥0.2cm，分別置入空塑料標本管和預存RNAlater的塑料標本管內，立即冰凍送檢和放入-80℃凍存。
　　2.2、外周血單個核細胞分離與保存:Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，離心后細胞沉淀加入少量的PBS，使細胞懸浮，再加入300μL的RNAlater，-80℃冰箱凍存。
　　3、實驗方法
　　3.1、肝組織病理狀態(tài)診斷:肝組織石

4、蠟切片Masson染色和蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin，HE)染色，參照2000年西安全國病毒性肝炎及肝病學術會議修訂的標準進行病理學分級（grading，G）和分期(staging，S)。
　　3.2、肝組織HBsAg和HBcAg測定:肝組織石蠟切片HBsAg和HBcAg表達強度采用免疫組織化學法（immunohisto-chemistry，IHC）（二步法）測定。
　　3.3、肝組織膠原纖維面積

5、比測定:肝組織石蠟切片Masson染色，采用美國PE公司(PerkinElmer)的智能切片分析系統(tǒng)測定肝組織膠原纖維的面積比。
　　3.4、肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量測定:采用反轉錄實時PCR測定。
　　4統(tǒng)計學分析
　　統(tǒng)計分析采用SPSS13.0軟件。肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與肝組織病理學狀態(tài)和肝組織HBsAg、 HBcAg表達強度之間

6、的相關性采用Spearman等級相關分析，與肝組織膠原纖維面積比之間的相關性采用Pearson線性相關分析。肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量在肝組織不同病理學分級、分期之間的差異采用單因素方差分析。性別、年齡、肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量預測肝組織不同病理學分級、分期的效能評價分別采用Byes逐步判別分析。肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量

7、預測肝組織膠原纖維面積比的評價采用曲線估計。
　　結果:
　　1、肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與患者性別、年齡、肝組織病理分級和分期、肝組織膠原纖維面積比之間的相關性
　　肝組織內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與患者性別呈顯著負相關（rs=-0.250，P=0.001、rs=-0.206，P=0.008;注:男性賦值為1，女性賦值為0）;與患者年齡呈顯著負相關(r=-0.298

8、，P=0.000、r=-0.240，P=0.002);與肝組織病理學分級、分期之間呈顯著負相關（雌激素受體αmRNA: rs=-0.484，P=0.000、rs=0.477，P=0.000;雄激素受體mRNA: rs=-0.591，P=0.000、rs=-0.523，P=0.000）;與肝組織膠原纖維面積比呈顯著負相關(r=0.421，P=0.000、r=-0.299，P=0.002);與肝組織HBsAg表達強度無顯著相關性(rs=0.

9、053，P=0.502、rs=0.081，P=0.053)，與肝組織HBcAg表達強度分別無顯著相關性和和呈顯著正相關(rs=0.101，P=0.202、rs=0.170，P=0.031)。
　　外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與患者性別無顯著相關性(rs=0.014，P=0.894、rs=-0.172，P=0.098;注:男性賦值為1，女性賦值為0);與患者年齡無顯著相關性(r=-0.099，P=0.357

10、、r=-0.032，P=0.771);與肝組織病理學分級、分期之間分別無顯著相關性和呈顯著負相關（雌激素受體αmRNA:rs=-0.085，P=0.436和rs=-0.012，P=0.913;雄激素受體mRNA: rs=-0.243，P=0.023和rs=-0.326，P=0.002）;與肝組織膠原纖維面積比分別無顯著相關性和呈負相關(r=-0.051，P=0.702、r=-0.108，P=0.051);與肝組織HBsAg表達強度無顯著

11、相關性(rs=0.143，P=0.184、rs=0.199，P=0.063)，與肝組織HBcAg表達強度分別無顯著相關性(rs=-0.169，P=0.116、rs=-0.085，P=0.430)。
　　2、肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量在肝組織病理分級和分期、肝組織之間的差異
　　肝組織內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量在不同病理學分級之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=30.056，P=0.0

12、00、F=45.819，P=0.000);在不同病理學分期之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=17.796，P=0.000、F=20.570，P=0.000)。
　　外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量在不同病理學分級之間的差異無統(tǒng)計學意義(F=0.180，P=0.836、F=2.577，P=0.082);雌激素受體αmRNA含量在不同病理學分級之間的差異無統(tǒng)計學意義(F=0.052，P=0.984)，雄激素受體mRNA

13、含量在不同病理學分期之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=3.434，P=0.021)。
　　3、性別、年齡、肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體含量預測肝組織不同病理學分級、分期的Byes逐步判別分析
　　以性別、年齡、肝組織內和肝組織內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量為自變量，肝組織病理學分級、分期為因變量，進行Byes逐步判別分析。結果，只有雄激素受體mRNA符合模型自變量納入標準，進入判別模型?；谛奂に厥?/p>

14、體的判別肝組織不同病理學分級的Fisher判別函數(shù)為:G1=-0.298+2.852×雄激素受體mRNA含量，G2=-1.208-0.098×雄激素受體mRNA含量，G3=-1.892-2.925×雄激素受體mRNA含量。基于雄激素受體的判別肝組織不同病理學分級的Fisher判別函數(shù)判別G1、G2、G3的正確率分別為88.9％、12.2％、49.0％?；谛奂に厥荏w的判別肝組織不同病理學分期的Fisher判別函數(shù)為:S1=-1.413+

15、3.148×雄激素受體mRNA含量，S2=-1.028+0.931×雄激素受體mRNA含量，S3=-2.542-2.215×雄激素受體mRNA含量，S4=-1.685-1.855×雄激素受體mRNA含量?；谛奂に厥荏w的判別肝組織不同病理學分期的Fisher判別函數(shù)判別S1、S2、S3、S4的正確率分別為48.0％、59.5％、0％和28.9％。
　　以性別、年齡、肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量為

16、自變量，肝組織病理學分級、分期為因變量，進行Byes逐步判別分析。結果，沒有一項指標符合模型自變量納入標準，進入判別模型。
　　4、肝組織內和外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的曲線估計
　　以肝組織內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量為自變量，肝組織膠原纖維面積比為因變量，進行曲線擬合。結果，基于雌受體αmRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的回歸模型的決定系數(shù)中，三次方模型的決

17、定系數(shù)最大(R2=0.094);肝組織膠原纖維面積比=0.187-0.128×雌激素受體αmRNA含量+0.081×雌激素受體αmRNA含量2+0.073×雌激素受體αmRNA含量3。基于雄激素受體mRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的回歸模型的決定系數(shù)中，三次方模型的決定系數(shù)最大(R2=0.202);肝組織膠原纖維面積比=0.311-2.692×雄激素受體mRNA含量+7.818×雄激素受體mRNA含量2-9.765×雄激素受體mRN

18、A含量3。
　　以外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量為自變量，肝組織膠原纖維面積比為因變量，進行曲線擬合。結果，基于雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的回歸模型不成立。
　　結論:
　　1、肝組織內雌激素受體α、雄激素受體表達水平與性別和年齡有關，男性患者雌激素受體α、雄激素受體表達水平低于女性患者;青春期及青春期后，隨著年齡增長，肝組織內雌激素受體α、雄激素受體表達水平逐

19、步降低。肝組織內雌激素受體α、雄激素受體表達可能參與慢性乙型肝炎發(fā)病和進展，肝組織內雌激素受體α、雄激素受體表達水平越低，肝組織炎癥活動度和纖維化程度越高。肝組織內雄激素受體可能促進HBcAg表達。
　　2、外周血單個核細胞內雌激素受體α、雄激素受體表達水平與性別和年齡無關。外周血單個核細胞內雄激素受體表達參與慢性乙型肝炎進展，外周血單個核細胞內雄激素受體表達水平越低，肝組織纖維化程度越高。外周血單個核細胞內雄激素受體表達不影響肝