Pim-3和bc1-2在人食管鱗癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、食管癌是一種較為常見的惡性程度極高的消化道腫瘤,是當(dāng)今世界上對人類健康危害最大的惡性腫瘤之一,隨著醫(yī)療水平的提高,食管癌的治療現(xiàn)狀較過去有明顯的改善。早期食管癌的治療最好的方法仍是手術(shù)切除;中晚期食管癌的治療現(xiàn)狀并不樂觀,用局部的手術(shù)治療難以達(dá)到滿意的療效,現(xiàn)階段食管癌的主要的治療方法為放療、化療及藥物治療,但目前術(shù)后復(fù)發(fā)率仍很高,病人五年生存率仍然十分低下,難以滿足目前醫(yī)療發(fā)展的最終目標(biāo)。當(dāng)前興起的靶向基因治療已經(jīng)成為對放、化療效果不

2、滿意的腫瘤病人治療的一種新型的替代手段。因而從分子水平上探討食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,找到針對抑制食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的有效的治療靶點(diǎn),對食管鱗癌的臨床治療、預(yù)防以及患者生存率和生存質(zhì)量的提高都具有極其重要的意義。
　　 Pim-3最初在鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞系PC12細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),并被鑒定為誘導(dǎo)去極化的基因KID-1,因?yàn)镵ID-1與表達(dá)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的原癌基因Pim家族具有高度的同源性,因而命名為Pim-3。近年來研究顯示,激

3、活的Pim激酶在惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要的作用,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系十分密切,并且在腫瘤細(xì)胞凋亡中起著重要的作用,其在腫瘤細(xì)胞中的凋亡作用機(jī)制可能是原癌基因Pim-3主要磷酸化Bad蛋白112位的絲氨酸,進(jìn)一步導(dǎo)致bcl-XL和bcl-2釋放,阻止細(xì)胞凋亡。迄今為止,原癌基因Pim-3和抑凋亡基因bcl-2之間的相互關(guān)系在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用在國內(nèi)外尚未見報(bào)道,本研究采用RT-PCR、Western blotting、原位雜交和

4、免疫組織化學(xué)4種不同的方法聯(lián)合檢測了食管癌高發(fā)區(qū)河南安陽的食管癌患者手術(shù)切除的癌組織中原癌基因Pim-3和抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白的表達(dá)情況,分析其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系,進(jìn)一步探討Pim-3和bcl-2在食管鱗癌組織中表達(dá)的相關(guān)性,該研究旨在為進(jìn)一步探討Pim-3和bcl-2在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用及尋找檢測食管鱗癌的新的分子靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.采用半定量RT-PCR方法檢測食管鱗癌組

5、織、癌旁不典型增生組織以及正常食管粘膜上皮組織中Pim-3和bcl-2 mRNA的相對表達(dá)水平。
　　 2.采用Western blotting方法檢測食管鱗癌組織、癌旁不典型增生組織以及正常食管粘膜上皮組織中Pim-3和bcl-2蛋白的相對表達(dá)水平。
　　 3.采用原位雜交技術(shù)檢測45例食管鱗癌組織、22例癌旁不典型增生組織以及45例正常食管粘膜上皮組織中Pim-3和bcl-2 mRNA的表達(dá),并分析其蛋白表達(dá)的相關(guān)性

6、。
　　 4.采用免疫組織化學(xué)方法檢測45例食管鱗癌組織、22例癌旁不典型增生組織以及45例正常食管粘膜上皮組織中Pim-3和bcl-2蛋白的表達(dá),并分析其蛋白表達(dá)的相關(guān)性。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS13.0軟件分析,采用X2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和方差分析以及相關(guān)性分析。P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.Pim-3的半定量RT-PCR結(jié)果表明,在食管鱗癌組織中能成功擴(kuò)增出500b

7、p的Pim-3基因,而在正常食管粘膜上皮組織中未見相應(yīng)的條帶。食管鱗癌組織和癌旁不典型增生組織中Pim-3相對表達(dá)豐度分別為0.809±0.015和0.092±0.009,而正常組織中的表達(dá)為0,三者之間的表達(dá)具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 2.Bcl-2的半定量RT-PCR結(jié)果表明,在食管鱗癌組織中能成功擴(kuò)增出595bp的bcl-2基因,而在正常食管粘膜上皮組織中未見相應(yīng)的條帶。食管鱗癌組織和癌旁不典型增生組織中bcl

8、-2相對表達(dá)豐度分別為0.671±0.011和O.102±0.007,而正常組織中的表達(dá)為0,三者之間的表達(dá)具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3.Western blotting結(jié)果表明,Pim-3和bcl-2蛋白在食管鱗癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá),而在正常食管粘膜組織中無表達(dá)。食管鱗癌組織中Pim-3和bcl-2蛋白的相對表達(dá)量分別為:0.796±0.018和0.757±0.014,顯著高于癌旁邊不典型增生組織中Pim-3和bc

9、l-2蛋白的相對表達(dá)(分別為:0.299±0.011和0.225±0.009),正常食管粘膜組織中Pim-3和bcl-2的相對表達(dá)為0,三者之間的表達(dá)具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4.原位雜交結(jié)果顯示,Pim-3 mRNA主要定位于細(xì)胞質(zhì)中,呈藍(lán)紫色顆粒。Pim-3 mRNA在食管鱗癌組織中高表達(dá),其陽性率為82.22％(37/45),顯著高于癌旁不典型增生組織和正常食管上皮組織中Pim-3 mRNA的表達(dá),二者的陽性

10、率分別為22.73％(5/22)和0.00％(0/45),三組之間表達(dá)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=82.487,P＜0.05)。
　　 5.Pim-3蛋白定位于細(xì)胞胞質(zhì)中,呈淺黃色至棕黃色顆粒。Pim-3蛋白高表達(dá)于食管鱗癌組織,陽性率高達(dá)75.56％(34/45),顯著高于癌旁不典型增生組織和正常食管上皮組織中Pim-3蛋白的表達(dá),其陽性率分別為:18.18％(4/22)和0.00％(0/45),三組之間表達(dá)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

11、義(x2=72.570,P＜0.05)。
　　 6.原位雜交結(jié)果顯示,bcl-2 mRNA主要定位于細(xì)胞質(zhì)中,呈藍(lán)紫色顆粒。在45例食管鱗癌組織中bcl-2 mRNA的陽性表達(dá)例數(shù)為35例,其陽性表達(dá)率為:77.78％(35/45),而在癌旁不典型增生組織為7例,其mRNA表達(dá)的陽性率為31.82％(7/22),在正常食管黏膜組織中尚未發(fā)現(xiàn)bcl-2mRNA的表達(dá)。Bcl-2 mRNA在食管鱗癌組織、癌旁不典型增生組織和正常食管

12、黏膜組織中的陽性表達(dá)率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=58.451,P＜0.05)。
　　 7.Bcl-2蛋白陽性染色定位于細(xì)胞胞質(zhì)中,呈淺黃色至棕黃色顆粒。免疫組化檢測結(jié)果表明,在45例食管鱗癌組織中bcl-2蛋白的陽性表達(dá)例數(shù)為32例,其陽性表達(dá)率為:71.11％(32/45),而在癌旁不典型增生組織為5例,其表達(dá)的陽性率為22.72％(5/22),在正常食管黏膜組織中尚未發(fā)現(xiàn)bcl-2蛋白的表達(dá)。Bcl-2蛋白在食管鱗癌組織

13、、癌旁不典型增生組織和正常食管黏膜組織中的陽性表達(dá)率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=52.724,P＜0.05)。
　　 8.利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件分析Pim-3 mRNA表達(dá)與食管鱗癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。結(jié)果表明,Pim-3 mRNA表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期具有明顯的相關(guān)性(P＜0.05),但與組織學(xué)分級、浸潤深度無關(guān)(P＞0.05)。
　　 9.Pim-3和bcl-2的相關(guān)性分析結(jié)果表明,在45例食管

14、鱗癌組織中,Pim-3蛋白陽性表達(dá)34例中,其bcl-2蛋白陽性表達(dá)占30例,而Pim-3蛋白陰性表達(dá)的11病例中,其bcl-2蛋白陰性表達(dá)占9例。Pim-3和bcl-2在食管鱗癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)關(guān)系(γp=0.664,P=0.000)。
　　 結(jié)論：
　　 1.食管鱗癌組織中Pim-3和bcl-2均呈現(xiàn)高表達(dá),而正常食管黏膜上皮組織中Pim-3和bcl-2的表達(dá)均缺失。
　　 2.食管鱗癌組織中Pim-