過量碘調(diào)節(jié)甲狀腺細(xì)胞自噬和凋亡以及與橋本甲狀腺炎關(guān)系的研究.pdf

1、目的:
　　碘是人體必須的微量元素之一，是合成甲狀腺激素的重要成分。甲狀腺激素可以維持人類正常生長及智力發(fā)育，并且調(diào)節(jié)能量代謝。碘缺乏可導(dǎo)致地方性甲狀腺腫和呆小癥的發(fā)生，但是長期攝入過量碘亦會引起甲狀腺疾病的發(fā)生。有研究顯示過量碘與橋本甲狀腺炎的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。本課題旨在研究過量碘對人甲狀腺細(xì)胞TGF-β1以及細(xì)胞自噬、凋亡的影響進(jìn)而探究與橋本甲狀腺炎的關(guān)系。
　　方法:
　　1.細(xì)胞自噬、凋亡相關(guān)蛋白以及TGF-β

2、1在橋本甲狀腺炎組織中的表達(dá):采用免疫組化法檢測橋本甲狀腺炎組織和正常組織細(xì)胞自噬、凋亡相關(guān)蛋白mTOR、LC3B-Ⅱ、caspase-3以及TGF-β1的表達(dá)水平。
　　2.甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori3-1經(jīng)碘化鉀處理后細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白mTOR、LC3B-Ⅱ以及TGF-β1的變化:利用Western blot技術(shù)檢測經(jīng)不同濃度的碘化鉀處理后細(xì)胞mTOR、LC3B-Ⅱ與TGF-β1表達(dá)量的變化。
　　3.甲狀腺上皮細(xì)胞

3、株Nthy-ori3-1經(jīng)TGF-β1處理后mTOR、LC3B-Ⅱ表達(dá)水平的改變。
　　4.用siRNA-TGF-β1處理甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori3-1后，檢測碘化鉀對其自噬的調(diào)節(jié)作用的變化。
　　5.流式檢測不同濃度碘化鉀處理后對Nthy-ori3-1細(xì)胞凋亡水平的影響。
　　6.噻唑藍(lán)法檢測經(jīng)不同濃度碘化鉀處理后Nthy-ori3-1細(xì)胞增殖能力的變化。
　　結(jié)果:
　　1.與正常甲狀腺組織比較

4、，橋本甲狀腺炎組織中細(xì)胞自噬蛋白LC3B-Ⅱ表達(dá)水平降低，自噬抑制信號蛋白mTOR、凋亡蛋白caspase-3表達(dá)水平增高，且TGF-β1表達(dá)水平低于正常對照組。
　　2.碘化鉀抑制Nthy-ori3-1細(xì)胞自噬并下調(diào)TGF-β1表達(dá):與對照組比較，梯度濃度碘化鉀處理致甲狀腺上皮細(xì)胞mTOR表達(dá)水平明顯升高，而LC3B-Ⅱ表達(dá)水平明顯下降，同時碘化鉀可下調(diào)甲狀腺上皮細(xì)胞TGF-β1的自表達(dá)，以10nmol碘化鉀處理組變化最顯著。<

5、br>　　3.TGF-β1誘導(dǎo)Nthy-ori3-1細(xì)胞自噬:與對照組相比，梯度濃度TGF-β1處理致甲狀腺上皮細(xì)胞mTOR表達(dá)下調(diào)，而LC3B-Ⅱ表達(dá)明顯上調(diào)。40ng/ml TGF-β1處理組LC3B-Ⅱ上調(diào)最明顯。
　　4.用siRNA-TGF-β1處理甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori3-1后，碘化鉀對其LC3B-Ⅱ的下調(diào)作用明顯減弱。
　　5.梯度濃度碘化鉀處理致甲狀腺上皮細(xì)胞的凋亡率明顯升高。
　　6.碘化鉀