犬乳恒牙替換期基質(zhì)金屬蛋白酶9的表達(dá)及意義.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谕ㄟ^研究乳恒牙替換期破骨細(xì)胞對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶9MMP-9表達(dá)的強(qiáng)弱來探討MMP-9在這一過程中的作用。為此，完成了以下4個(gè)實(shí)驗(yàn)： 實(shí)驗(yàn)1：為破骨細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的研究。本實(shí)驗(yàn)采用新生大鼠顱蓋骨消化法培養(yǎng)成骨細(xì)胞，再加入細(xì)胞因子，分別刺激脾細(xì)胞和骨髓細(xì)胞中單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化。結(jié)果表明：骨髓細(xì)胞組單核細(xì)胞融合形成破骨細(xì)胞的時(shí)間早于脾細(xì)胞組，而且破骨細(xì)胞的數(shù)量也較脾細(xì)胞組多，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)2：為體外培

2、養(yǎng)破骨細(xì)胞MMP-9的免疫組化[4]及原位雜交研究。本實(shí)驗(yàn)采用新生1d內(nèi)的SD大鼠為取材標(biāo)本，運(yùn)用顱蓋骨消化法和骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)破骨細(xì)胞。破骨細(xì)胞經(jīng)TRAP染色鑒定后，再進(jìn)行免疫組化及原位雜交染色，免疫組化染色結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)組破骨細(xì)胞染色陽性，對(duì)照組(用PBS代替一抗)陰性。原位雜交染色結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)組破骨細(xì)胞染色陽性，對(duì)照組(用PBS代替探針)陰性。 實(shí)驗(yàn)3：為犬乳恒牙替換期破骨細(xì)胞數(shù)量的研究。分別取乳牙列期，乳恒牙替換期，恒牙

3、列期的本地犬各一只，解剖分離頸動(dòng)脈后斷頭處死，頸動(dòng)脈插管，用生理鹽水沖洗，4％甲醛溶液進(jìn)行組織內(nèi)固定，分離上、下頜骨，外固定，脫鈣，截取牙根及其周圍組織的組織塊，制備石蠟切片，HE染色。結(jié)果表明：替牙列期犬牙根周圍組織破骨細(xì)胞數(shù)量明顯高于乳牙列期組，與恒牙列期組雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但其絕對(duì)值仍然高于恒牙列期組。 實(shí)驗(yàn)4：為犬乳恒牙替換期MMP-9的免疫組化及原位雜交研究。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及石蠟切片制備同實(shí)驗(yàn)三，石蠟切片制備好后進(jìn)行免疫組化及