GPR91受體對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中VEGF表達的影響及調(diào)控機制的研究.pdf

1、[目的]
　　通過建立糖尿病大鼠模型,觀察糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中G蛋白偶聯(lián)受體91(GPR91)對血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達的調(diào)控及視網(wǎng)膜病理改變的影響。進一步探討糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中GPR91對VEGF表達的相關(guān)調(diào)控機制,為糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)的基因治療提供理論基礎(chǔ)。
　　[方法]
　　健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠通過一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病模型。構(gòu)建GPR91 shRNA

2、的慢病毒載體及相應(yīng)的慢病毒空載體。氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GS-MS)檢測不同時間段糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中琥珀酸的含量。Western blotting和免疫熒光檢測糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中GPR91,p-ERK1/2和COX-2的表達的表達情況。HE染色,透射電鏡和依文思藍滲漏實驗觀察14周糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管功能及超微結(jié)構(gòu)的變化。qPCR檢測COX-2和VEGF的mRNA表達。ELISA檢測玻璃體中PGE2和VEGF的分泌情況。
　　[結(jié)果

3、]
　　糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中的琥珀酸含量較對照組有一定程度的增加(P<0.01),但GPR91的表達在對照組和糖尿病組中沒有明顯差異。14周的糖尿病組中,可觀察到視網(wǎng)膜內(nèi)層血管擴張,內(nèi)核層細胞損傷,毛細血管的基底膜增厚以及血管滲漏增加等病理改變。在LV.shGPR91組中各種血管紊亂的情況均得到明顯改善,但損傷的內(nèi)核層細胞無明顯改變。糖尿病組中,p-ERK1/2、COX-2、PGE2及VEGF的表達均高于對照組。玻璃體腔注射 LV.

4、shGPR91慢病毒后,p-ERK1/2、COX-2、PGE2及 VEGF的表達顯著降低(P<0.01)。同時,在玻璃體腔注射U0126組和NS-398組中,COX-2, PGE2及VEGF的表達也均明顯減少(P<0.01)。
　　[結(jié)論]
　　(1)成功建立了糖尿病大鼠模型,并觀察到糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中琥珀酸的蓄積, GPR91主要表達神經(jīng)神經(jīng)節(jié)細胞中及VEGF分泌的增加。
　　(2)通過構(gòu)建攜帶GPR91 shRNA