益婦寧軟膠囊治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與研究目的：絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(PMO)指主要由絕經(jīng)后雌激素水平低落引起的骨質(zhì)疏松癥。PMO的主要病理生理改變是激素水平降低，骨轉(zhuǎn)換增加，導(dǎo)致骨丟失加速。該病的發(fā)病率逐年升高，它的發(fā)病是由體內(nèi)激素、遺傳基因、營(yíng)養(yǎng)因素、生活習(xí)慣等多因素共同作用的；近年研究發(fā)現(xiàn)，其中雌激素水平降低是最重要的原因，而雌激素主要通過(guò)雌激素受體(ER)介導(dǎo)發(fā)揮其生物效應(yīng)。ER存在于各種骨細(xì)胞中，表明雌激素通過(guò)多途徑直接促進(jìn)成骨細(xì)胞的活化和抑制破骨細(xì)胞的活性，調(diào)

2、控骨再建周期中的骨質(zhì)形成、骨質(zhì)吸收及骨再建率。目前，ER的兩種亞型在骨中的具體作用機(jī)制和相互關(guān)系尚有待于進(jìn)一步研究。雌激素水平下降還可以間接通過(guò)甲狀旁腺激素(PTH)和降鈣素(CT)的變化，或影響骨代謝的局部調(diào)節(jié)因子，導(dǎo)致骨代謝偶聯(lián)失衡，使骨質(zhì)的吸收大于骨質(zhì)的重建，結(jié)果導(dǎo)致骨小梁結(jié)構(gòu)破壞，骨量丟失。對(duì)于絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的治療，主要是抗骨質(zhì)吸收，目前美國(guó)FDA只批準(zhǔn)雌激素替代療法(PRT)用于臨床治療。ERT的治療效果比較確鑿，但由于有很

3、多副作用，該療法備受置疑。既保留雌激素對(duì)骨的保護(hù)作用，又避免雌激素相關(guān)副作用的理想治療藥物——選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMs)的研發(fā)是現(xiàn)在研究的熱點(diǎn)。 中醫(yī)學(xué)根據(jù)其病因病機(jī)和臨床表現(xiàn)，認(rèn)為該病定性定位較準(zhǔn)確的當(dāng)屬“骨痿”。中醫(yī)認(rèn)為腎中精虧髓虛，是發(fā)生PMO的實(shí)質(zhì)所在，脾虛、肝郁、肝虛和血瘀相互影響，促使骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。臨床以補(bǔ)腎為主，輔以健脾，疏肝活血的中藥來(lái)治療該病，取得了一定療效，但存在很多不足之處，關(guān)于中藥開(kāi)發(fā)SER

4、Ms也剛剛起步。益婦寧軟膠囊(YFN)以蛤蟆油和莪術(shù)來(lái)補(bǔ)腎益精、調(diào)和氣血，攻補(bǔ)兼施，標(biāo)本同治。前期的臨床及實(shí)驗(yàn)研究均已證實(shí)，YFN可以有效改善下丘腦-垂體-性腺軸的激素分泌失調(diào)，調(diào)節(jié)植物神經(jīng)遞質(zhì)紊亂，緩解更年期癥狀；YFN還能降低尿鈣(Ca)、尿Ca和尿肌酐(Cr)的比值、尿羥脯胺酸(Hyp)和尿Cr的比值、血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)的水平，提高血清堿性磷酸酶(ALP)和CT的水平，提示YFN對(duì)PMO有防治作用。本研究以PMO

5、經(jīng)典動(dòng)物模型去勢(shì)大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，選用各項(xiàng)具有代表意義的指標(biāo)，觀察YFN對(duì)PMO的治療作用，并探討其深層治療機(jī)制。 主要內(nèi)容包括：1.YFN對(duì)實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松大鼠的藥效學(xué)影響；2.YFN對(duì)對(duì)實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松大鼠的藥理作用機(jī)制研究。 方法：1.制備去勢(shì)雌性大鼠模型，隨機(jī)分為6組：模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、YFN大、中、小劑量組，假手術(shù)對(duì)照組。按照相應(yīng)劑量灌服藥物，給藥結(jié)束后，取待測(cè)組織檢測(cè)。 2.用放射免疫法測(cè)定血清性激

6、素含量(按藥盒說(shuō)明書操作)，全自動(dòng)生化分析儀分析血清鈣(Ca)、磷(P)、堿性磷酸酶(ALP)含量。用雙能X線骨密度儀測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組大鼠的骨密度。 3.測(cè)量各實(shí)驗(yàn)組大鼠肱骨長(zhǎng)度、橫徑及肱骨干重、濕重；采用原子吸收光譜法測(cè)定骨礦物質(zhì)Ca，Mg，Zn，Mn含量；用萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)測(cè)試骨生物力學(xué)指標(biāo)。 4.制作脫鈣骨組織病理切片，觀察其病理改變并測(cè)定骨小梁面積；用免疫組化、免疫熒光和免疫印跡法(westernblotting)檢測(cè)

7、ER在各實(shí)驗(yàn)組大鼠骨組織的表達(dá)情況。 結(jié)果：1.YFN能明顯提高去勢(shì)大鼠體內(nèi)雌激素水平，調(diào)節(jié)體內(nèi)激素水平；使血清Ca含量升高，血P，ALP含量降低；調(diào)節(jié)負(fù)鈣平衡和膠原代謝，維持骨吸收和骨重建的正常速率。 2.YFN能使去勢(shì)大鼠骨長(zhǎng)、寬、干重、濕重增加；增加骨Ca，Mg，Zn，Mn等礦物質(zhì)含量，幫助維持骨鹽代謝平衡，并且密切聯(lián)系骨有機(jī)質(zhì)代謝，減緩骨質(zhì)疏松進(jìn)程。 3.YFN能增強(qiáng)絕經(jīng)后疏松骨質(zhì)的密度，增加骨小梁面積，

8、明顯提高去勢(shì)大鼠骨組織生物力學(xué)性能，同時(shí)提高PMO動(dòng)物模型骨質(zhì)量和骨生物力學(xué)性能，提高骨的承載能力和抵抗外力沖擊的能力。 4.YFN能提高去勢(shì)大鼠骨組織內(nèi)ER的表達(dá)量，使雌激素作用位點(diǎn)增加，實(shí)現(xiàn)雌激素對(duì)于骨代謝的保護(hù)作用。 結(jié)論：YFN能明顯提高去勢(shì)大鼠體內(nèi)雌激素水平；增強(qiáng)絕經(jīng)后疏松骨質(zhì)的密度和骨礦物質(zhì)含量；提高其骨組織雌激素受體的表達(dá)量，對(duì)PMO有較好的治療作用。其機(jī)制不僅是通過(guò)增加體內(nèi)雌激素水平，更可以調(diào)節(jié)體內(nèi)微量元