一、胰島β細(xì)胞凋亡和功能研究 二、吡格列酮、瑞格列奈、那格列奈治療對(duì)2型糖尿病患者血清游離脂肪酸成分的影響.pdf

1、目的：觀察高脂、高碳水化合物飲食對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰島β細(xì)胞內(nèi)過氧化物體增殖物激活受體-α、γ(PPAR-α、γ)和炎性因子表達(dá)的影響，及其對(duì)β細(xì)胞凋亡和功能的影響并探討相關(guān)機(jī)理，同時(shí)對(duì)吡格列酮、非諾貝特干預(yù)后藥物的作用進(jìn)行探討。 方法：建立肥胖大鼠動(dòng)物模型，雄性S-D大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(control)、高脂飲食組[單純高脂飲食組(fo)、高脂+非諾貝特組(ff)、高脂+吡格列酮組(fp)]、高碳水化合物飲食組[單純高碳水化合物組

2、(co)、高碳水+非諾貝特組(cf)、高碳水+吡格列酮組(cp)]。干預(yù)在第8-10周結(jié)束。動(dòng)物的胰腺組織分別進(jìn)行組織標(biāo)本制備、胰島的分離純化，HE染色切片上測(cè)定胰島面積；TUNEL檢測(cè)胰島細(xì)胞凋亡；免疫組織化學(xué)、Westernblot檢測(cè)胰島中目的蛋白(包括胰島內(nèi)分泌激素Insulin、Glucagon、ss；糖、脂代謝重要的調(diào)節(jié)因子PPAR-α、γ；炎癥介質(zhì)NF-κB、I-κB、P38、ERK1；凋亡調(diào)控因子caspase-3)；原

3、位雜交、RT-PCR檢測(cè)目的核酸水平。 結(jié)果：1.co和fo組動(dòng)物胰島面積比對(duì)照組明顯增大，各組間細(xì)胞成分無明顯差別，co和fo組胰島素信號(hào)明顯弱于對(duì)照組。吡格列酮使胰島面積較未用藥組明顯減小，但使胰島素的染色強(qiáng)度增強(qiáng)。2.co和fo組胰島中PPAR-γ、PPAR-α蛋白和mRNA水平比對(duì)照組明顯減低。吡格列酮使PPAR-γ蛋白和mRNA水平明顯升高，非諾貝特使PPAR-α表達(dá)水平明顯升高。3.高脂組動(dòng)物胰島中NF-κB、P38

4、、ERK1蛋白及mRNA表達(dá)比正常對(duì)照組、高碳水化合物明顯增強(qiáng)；非諾貝特能夠降低NF-κB、P38的水平，增加I-κB的表達(dá)；吡格列酮能降低NF-κB、P38、ERK1的表達(dá)水平。4.從對(duì)照組、co到fo組，caspase-3蛋白及mRNA水平依次升高，非諾貝特和吡格列酮使co和fo組caspase-3的水平有所下降；各組中胰島細(xì)胞凋亡少見。 結(jié)論：在高碳水化合物和高脂飼養(yǎng)造成的胰島素抵抗模型中，胰島的面積和胰島素的儲(chǔ)備功能發(fā)生

5、了變化，重要的功能分子PPAR-γ、PPAR-α表達(dá)異常，多種炎癥介質(zhì)水平增高，凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)增加，盡管還沒有檢測(cè)到明顯的β細(xì)胞凋亡和血糖升高，但胰島細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)存在明顯的炎癥、凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)的紊亂，已明顯處于前炎癥和前凋亡狀態(tài)。非諾貝特和吡格列酮能夠通過不完全相同的機(jī)制，在一定程度上糾正了胰島功能的異常和炎性介質(zhì)水平的紊亂，預(yù)先保護(hù)β細(xì)胞。目的：建立鐵超負(fù)荷的動(dòng)物模型，觀察鐵超負(fù)荷對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠糖代謝、胰島細(xì)胞功能及凋亡的影響。

6、 方法：雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為四組：鐵干預(yù)組(A組)、Na2NTA對(duì)照組(B組)、鐵干預(yù)加去鐵組(C組)、空白對(duì)照組(D組)，干預(yù)持續(xù)八周。于實(shí)驗(yàn)開始、第5周、第10周時(shí)行腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)，確定造模成功后采血測(cè)血漿NO水平，取胰腺組織做電鏡檢查；針對(duì)PPAR-α、PPAR-γ、NF-κB、iNOS、Caspase-3作免疫組織化學(xué)染色以及核酸原位雜交；檢測(cè)胰島中Insulin、Glucagon、ss的水平，測(cè)定大鼠胰島面積。

7、分離正常大鼠的胰島細(xì)胞進(jìn)行FeNTA體外灌注。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)第10周時(shí)，A、C組糖負(fù)荷前血糖較B、D組有增高趨勢(shì)，2小時(shí)血糖較B、D組增高；各組間血漿NO含量均在正常范圍內(nèi)，組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。電鏡示A組大鼠β細(xì)胞胰島素分泌顆粒明顯減少，且普遍存在輕-中度的線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，并出現(xiàn)核膜消失等細(xì)胞壞死或壞死前的改變。A組大鼠的胰島的平均面積明顯小于其它組；各組間胰島細(xì)胞的組成沒有明顯變化；A組中β細(xì)胞胞漿中胰島素的染色強(qiáng)度弱

8、于其他組；體外正常胰島細(xì)胞灌注實(shí)驗(yàn)證實(shí)FeNTA能導(dǎo)致β細(xì)胞的急性分泌功能喪失。A組動(dòng)物胰島PPAR-γ蛋白及mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯減低，PPAR-α蛋白表達(dá)也減低，胰島中NF-κB、iNOS、Caspase-3蛋白以及NF-κB、Caspase-3mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組有所增加。A組大鼠胰島β細(xì)胞凋亡增加，其他三組中β細(xì)胞凋亡少見。 結(jié)論：鐵超負(fù)荷引起明顯的氧化-應(yīng)激，NF-B以及iNOS等炎性細(xì)胞因子激活，具有抗炎作

9、用以及促生長(zhǎng)作用的PPAR-γ和PPAR-a在胰島的表達(dá)減弱，多種因素共同參與了β細(xì)胞的凋亡增加。胰島β細(xì)胞凋亡可能是鐵超負(fù)荷組動(dòng)物胰島細(xì)胞團(tuán)面積減少、糖耐量受損的主要原因；鐵在體內(nèi)的致凋亡作用是通過凋亡調(diào)控分子Caspase-3介導(dǎo)的；去鐵措施對(duì)β細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用。目的：1、比較2型糖尿病患者和非糖尿病的健康人之間血清游離脂肪酸(FreeFattyAcid，F(xiàn)FA)中各種成分的水平。2、觀察匹格列酮、瑞格列奈、那格列奈藥物治療

10、對(duì)2型糖尿病患者血清游離脂肪酸成分的影響。 方法：征集25例糖耐量正常者作為對(duì)照組，符合1999年WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)的2型糖尿病患者65例，對(duì)匹格列酮組(25例)進(jìn)行了為期一年的觀察。而對(duì)40例2型糖尿病患者隨機(jī)分為瑞格列奈組(18例)、那格列奈組(22例)進(jìn)行治療，治療前2周為平衡期，療程3月。采用改進(jìn)的高效液相色譜RHPLC法檢測(cè)各組患者治療前、治療后晨空腹血清游離脂肪酸的主要成分(月桂酸、豆蔻酸、花生四烯酸、亞油酸、軟脂酸、油

11、酸、硬脂酸)水平并比較。匹格列酮組患者繼續(xù)治療至1年后再次測(cè)定空腹血清游離脂肪酸的成分。 結(jié)果：(1)2型糖尿病患者血清中的月桂酸、豆蔻酸和硬脂酸的水平比正常對(duì)照明顯升高(P＜0.05)。(2)吡格列酮治療3月后血清FFA總濃度(TFA)下降、血清中主要的飽和脂肪酸豆蔻酸、軟脂酸、硬脂酸的濃度比治療前明顯降低(P＜0.001)，不飽和脂肪酸(UFA)與飽和脂肪酸(SFA)的比值(UFA/SFA)明顯升高；治療1年后的數(shù)據(jù)顯示：飽

12、和脂肪酸水平進(jìn)一步降低，不飽和脂肪酸油酸、亞油酸的水平也有顯著下降(P＜0.005)；UFA/SFA的比值恢復(fù)至治療前的水平。(3)瑞格列奈治療3月后糖尿病患者血清總FFA濃度無明顯下降，檢測(cè)的七種游離脂肪酸成分的濃度較治療前均有輕度下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；那格列奈治療3月后，月桂酸有一定程度下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而豆蔻酸、軟脂酸的水平較治療前升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；UFA/SFA的比值在瑞格列奈治療前后變化

13、不大，在那格列奈治療后明顯降低。兩種藥物作用比較發(fā)現(xiàn)瑞格列奈與那格列奈兩種藥物對(duì)豆蔻酸、亞油酸、軟脂酸三種主要成分以及TFA、SFA的總量的影響具有顯著差異，對(duì)SFA/TFA、UFA/TFA以及UFA/SFA在血清中的比例都沒有明顯影響。 結(jié)論：匹格列酮治療可以明顯降低2型糖尿病患者血清游離脂肪酸的水平，改變脂肪酸的成分，其治療初期以降低飽和脂肪酸為主，UFA/SFA明顯增高；長(zhǎng)期治療可以使血清中不飽和脂肪酸的水平降低，但UFA