生地黃止血物質(zhì)基礎(chǔ)及海綿劑制備工藝研究.pdf

1、本文選用唐代孫思邈《千金方》中收載藥方[1]：生地黃湯為對象，研究了方中的君藥生地黃的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并對由此基礎(chǔ)發(fā)展而來的海綿劑進(jìn)行了制備工藝、質(zhì)量評價(jià)等方面的研究。
　　 目的：初步篩選生地黃止血作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。研究生地黃止血有效部位HPLC指紋圖譜。優(yōu)選生地黃的提取工藝，篩選出最佳工藝參數(shù)。篩選生地黃止血海綿劑的最佳制備工藝。建立生地黃止血海綿劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　 方法：采用經(jīng)典的系統(tǒng)溶劑法(極性由小到大:石油醚

2、-乙酸乙酯-正丁醇-乙醇)提取生地黃水煎液，用剪尾法和毛細(xì)玻管法測定出、凝血時(shí)間，比較各部位的止血作用；將篩選出的有效部位用大孔吸附樹脂進(jìn)行分離純化，用不同濃度乙醇進(jìn)行梯度洗脫，用剪尾法和毛細(xì)玻管法測定出、凝血時(shí)間，比較各洗脫部位的止血作用。采用高效液相色譜法，Akasil-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，乙腈-水梯度洗脫，檢測波長為210nm，流速1.0ml/min，柱溫30℃。確定了生地黃止血有效部位的10批指紋圖譜共有

3、模式，進(jìn)行了相似度比較。以樣品中多糖含量、各指紋峰相對于梓醇含量的加和作為評價(jià)指標(biāo)，考察藥材浸泡時(shí)間，加水量，提取時(shí)間等因素對生地黃提取工藝的影響。采用單因素實(shí)驗(yàn)法，以外觀質(zhì)量、吸水力為評價(jià)指標(biāo)，考察海綿劑的輔料種類、藥物與明膠比例2個(gè)因素對海綿劑成型性的影響。采用薄層色譜法對止血海綿中生地黃進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定了各指紋峰相對于梓醇的含量；采用紫外分光光度法測定止血海綿中多糖含量。
　　 結(jié)果：乙醇部位可明顯縮短

4、小鼠的出、凝血時(shí)間；水洗脫液、30％乙醇洗脫液、80％乙醇洗脫液均能縮短小鼠的出、凝血時(shí)間，水洗脫液劑量與止血作用有明顯的正相關(guān)性,30％乙醇洗脫液量效關(guān)系不明顯,80％乙醇洗脫液止血作用量效關(guān)系呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性。確定了生地黃止血有效部位的10批指紋圖譜共有模式，進(jìn)行了相似度比較。最佳提取工藝為：藥材用12倍量水，浸泡15min，提取時(shí)間為1.5h，提取3次。海綿劑的輔料選用明膠、吐溫-80,藥物與明膠比例為1:1。定性鑒別薄層色譜斑點(diǎn)清晰

5、；葡萄糖在0.0067～0.067mg/ml呈良好線性關(guān)系；梓醇在0.13～2.6μg.呈良好線性關(guān)系。
　　 結(jié)論：生地黃止血作用的藥效活性物質(zhì)大多存在于乙醇部位，其止血作用的活性成分與糖類、環(huán)烯醚萜苷類有關(guān)。所建立的方法可用于生地黃止血有效部位指紋圖譜測定，并可對其制劑的質(zhì)量評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。該提取工藝參數(shù)客觀可行、穩(wěn)定合理，可為工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。通過指標(biāo)考察，制備工藝合理可行，成品質(zhì)量基本穩(wěn)定。建立生地黃止血海綿劑的