CDglyTK融合基因聯(lián)合芹黃素對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文CDglyTK融合基因聯(lián)合芹黃素對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用姓名：盛新華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：普通外科學(xué)指導(dǎo)教師：卿三華20060520摘要2、觀察芹黃素對(duì)乳腺癌細(xì)胞體外侵襲能力的抑制作用及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響。3、觀察芹黃素預(yù)處理對(duì)CD出yTK融合基因系統(tǒng)殺傷乳腺癌細(xì)胞旁觀者效應(yīng)的調(diào)控以及聯(lián)合應(yīng)用這兩種處理方法對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)研究，為將這兩種治療方法聯(lián)合應(yīng)用于乳腺癌治療的體內(nèi)抑

2、瘤效應(yīng)研究奠定基礎(chǔ)。方法I、細(xì)菌內(nèi)同源重組法制備含CD百yTK融合基因的重組腺病毒。胞嘧啶脫氨酶和胸苷激酶融合基因CDglyTK自逆轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒pWZLaeoCDglyTK中切出，亞克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒中，形成轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pAdtrackCMVCDglyTK，將之PmeI酶切線性化后與腺病毒基因組質(zhì)粒pAde姆l共轉(zhuǎn)化BJ5183菌，抽提重組體腺病毒質(zhì)粒DNA，PacI酶切后轉(zhuǎn)染人胚腎293細(xì)胞包裝成腺病毒顆粒，采用PCR方法對(duì)重組體腺

3、病毒進(jìn)行鑒定，利用綠色熒光蛋白報(bào)告基因?qū)Σ《镜味群透腥拘蔬M(jìn)行測(cè)定，WesternBlot檢測(cè)感染重組腺病毒的人乳腺癌細(xì)胞MCF7中有無(wú)目的基因的表達(dá)。2、腺病毒載體介導(dǎo)的CDglyTK融合基因系統(tǒng)對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用及旁觀者效應(yīng)。重組腺病毒制備成功后，按20pfu／細(xì)胞的比率將重組腺病毒接種于人乳腺癌細(xì)胞MCF7，給予不同濃度的前藥(GCV和5FC)處理。設(shè)GCV組、5FC組、GCV5FC組及陰性對(duì)照組，觀察各組乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)情況