不結(jié)球白菜霜霉病抗性機(jī)制及其分子標(biāo)記.pdf

1、本文對(duì)不結(jié)球白菜的抗霜霉病的生理生化機(jī)制及其分子標(biāo)記做了相關(guān)的研究，其中重要內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面： 1．通過(guò)人工接種方法對(duì)不結(jié)球白菜的抗感兩個(gè)親本、F<,1>以及F<,2>進(jìn)行了抗霜霉病鑒定，并分別在子葉期和4葉期進(jìn)行兩次鑒定，以確定霜霉病的抗性是否在不同的生育期發(fā)生了轉(zhuǎn)變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)親本無(wú)論在子葉期還是在4葉期的鑒定結(jié)果與其基因型是一致的，F(xiàn)<,1>在子葉期和4葉期也都表現(xiàn)為抗病，說(shuō)明了霜霉病在本實(shí)驗(yàn)所用的材料中沒(méi)有發(fā)生抗

2、性的轉(zhuǎn)變；F<,2>中的144株單株同樣在子葉期和真葉期都表現(xiàn)出近似3:1的分離比，初步認(rèn)為不結(jié)球白菜對(duì)霜霉病的抗性應(yīng)該存在一個(gè)顯性的主效基因在起作用，但也不排除其它微效基因的作用。 2．通過(guò)人工接種方法，研究了不同抗性不結(jié)球白菜品種在接種霜霉病菌后120h內(nèi)PPO、POD、PAL及β-1，3-葡聚糖酶的活性變化，以探索不結(jié)球白菜葉片中防御酶活性與抗霜霉病的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在接種病原菌后，相對(duì)于對(duì)照，4種酶的活性在抗感品種中都呈

3、現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，且抗病品種的4個(gè)酶活性都明顯高于感病品種，PPO、POD、PAL及β-1，3-葡聚糖酶活性的峰值分別出現(xiàn)在接種后的72、96、72和96h，與感病品種相比，抗病品種的4種酶活性不僅升高的速度快，幅度大，而且高活性維持的時(shí)間長(zhǎng)。 3．對(duì)影響AFLP反應(yīng)中的幾個(gè)關(guān)鍵因素進(jìn)行不同的處理，優(yōu)化了AFLP反應(yīng)體系，并確定了不結(jié)球白菜AFLP最佳的選擇性擴(kuò)增體系。首先，在酶切和連接中對(duì)不同濃度的DNA模板的研究發(fā)現(xiàn)，DNA

4、的用量在25～250ng／μl時(shí)都可以滿足AFLP反應(yīng)的需要。另外，對(duì)不同濃度的Mg<'2+>和dNTPs處理結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在本實(shí)驗(yàn)中Mg<'2+>的濃度對(duì)選擇性擴(kuò)增的結(jié)果起決定性作用，不同濃度的dNTPs對(duì)選擇性擴(kuò)增的結(jié)果沒(méi)有太大的影響，最終確定了不結(jié)球白菜最佳的選擇性擴(kuò)增體系。 4．研究了與抗霜霉病基因緊密連鎖的RAPD、ISSR、AFLP分子標(biāo)記，利用不結(jié)球白菜抗病品種014和感病品種010雜交的F<,2>群體為材料，通過(guò)人工