手針和電針足三里對(duì)腰髓背角神經(jīng)元放電的影響.pdf

1、研究背景：中醫(yī)歷代經(jīng)典著作如《靈樞》、《難經(jīng)》、《標(biāo)幽賦》都詳細(xì)論述了“得氣”和“氣至病所”與臨床療效密切相關(guān)。各種手法在激發(fā)和維持經(jīng)氣中具有重要作用，但是對(duì)于各種手法是如何激發(fā)經(jīng)氣的機(jī)制沒(méi)有明確說(shuō)明?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為針刺得氣時(shí)往往引起局部組織的酸、麻、重、脹等復(fù)合的不愉快感覺(jué)，為多種組織感受刺激的結(jié)果。腧穴的得氣感可以形成于從皮膚至骨膜的所有組織結(jié)構(gòu)中，包括游離神經(jīng)末梢、肌梭、環(huán)層小體、克氏終球及關(guān)節(jié)囊感覺(jué)器等，這些組織結(jié)構(gòu)是針感的物質(zhì)基

2、礎(chǔ)。針刺得氣是通過(guò)針刺手法來(lái)實(shí)現(xiàn)的。通過(guò)不同手法得氣是臨床上最常用的，但對(duì)其作用機(jī)理的研究至今尚未有肯定明確的答案。有人運(yùn)用現(xiàn)代生物力學(xué)的手段，對(duì)不同的針刺手法用力學(xué)模型來(lái)描述，經(jīng)過(guò)分析得出能量耗散效率最大的針刺頻率在0～8Hz最明顯，高于8Hz敏感性下降。手法運(yùn)針頻率在0.6～1.8Hz范圍內(nèi)，平均1.2Hz，此值具有生理意義。 手法和得氣與臨床療效的關(guān)系十分密切。恰當(dāng)?shù)倪x擇針刺手法直接關(guān)系到得氣與否和得氣感的強(qiáng)弱。采用不同的

3、針刺操作手法可以促進(jìn)得氣感的出現(xiàn)，延長(zhǎng)作用時(shí)間并達(dá)到補(bǔ)虛瀉實(shí)的效果。從穴位形態(tài)學(xué)和神經(jīng)解剖學(xué)來(lái)講，不同的針刺手法會(huì)相對(duì)特異性的刺激一類感受器，從而引起不同類型神經(jīng)纖維的興奮，產(chǎn)生不同的效應(yīng)。通過(guò)不同手法得氣是臨床上最常用的，但對(duì)其作用機(jī)理的研究至今尚未有肯定明確的答案。不同的針刺手法及提插捻轉(zhuǎn)的強(qiáng)度和深度，可以激活與穴位有關(guān)的各種神經(jīng)感受裝置和各類不同直徑的傳入纖維，從而引起不同的針刺效應(yīng)。手針刺激所引起的得氣感和電針不同，針刺效果也不

4、同。針刺手法多樣，不同的針刺手法用于不同病癥的治療，即使同一個(gè)穴位，因針刺手法的不同也會(huì)引起不同的效應(yīng)。綜合以往的文獻(xiàn)報(bào)道，發(fā)現(xiàn)針刺手法和得氣與穴位相對(duì)應(yīng)的節(jié)段背角神經(jīng)元放電的關(guān)系很密切。我們猜想不同的刺激方式(手針、電針)作用于穴位產(chǎn)生不同的針刺效應(yīng)可能是對(duì)穴位相應(yīng)的脊髓背角神經(jīng)元放電的影響程度不同所致。因此我們?cè)O(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，試圖以腰髓背角神經(jīng)元放電頻率為觀察指標(biāo)，通過(guò)對(duì)足三里穴區(qū)實(shí)施不同的針刺手法(手針，電針)來(lái)比較各種針刺手法作

5、用足三里對(duì)腰髓節(jié)段背根神經(jīng)元放電的影響，探討針刺手法與得氣的神經(jīng)電生理機(jī)制；運(yùn)用組織化學(xué)的方法觀察足三里感覺(jué)傳入神經(jīng)元在背根神經(jīng)節(jié)的分布、形態(tài)特征及其與不同針刺手法的關(guān)系。以期對(duì)不同針刺手法得氣機(jī)理的研究及針刺作用機(jī)理的研究提供新內(nèi)容，對(duì)提高針灸療效具有重要的意義。 研究方法：1電生理學(xué)研究細(xì)胞外記錄腰髓背角神經(jīng)元放電與手針和電針足三里穴的關(guān)系方法：選用健康成年雄性Wistar大鼠，體重300～350克。大鼠稱重后，腹腔注射10

6、﹪烏拉坦(1g/kg)，將大鼠充分麻醉。將大鼠俯臥固定，手術(shù)暴露腰髓，在解剖顯微鏡下小心地將硬脊膜剪開(kāi)后盡快滴38℃左右的石蠟油防止脊髓水分蒸發(fā)。將大鼠移到脊髓固定架上，用脊髓夾固定穩(wěn)妥。用推進(jìn)器將灌流合格的微電極插入腰髓背角區(qū)域，距后正中溝旁開(kāi)0.5～1.0mm，深度約在脊髓表面下500～1000μm。設(shè)置好記錄參數(shù)后進(jìn)行記錄(采集頻率：20KHz，通道模式：生物電，掃描速度：20ms/div，靈敏度：2mV，時(shí)間常數(shù)：0.002s，

7、濾波頻率：3KHz)。 記錄方法如下：①不做任何手法刺激，用推進(jìn)器將微電極插入腰髓背角區(qū)域，待其放電穩(wěn)定后開(kāi)始記錄20min作為基線。記錄生理狀態(tài)下腰髓背角神經(jīng)元的放電，以2min為一個(gè)時(shí)間單位，每只動(dòng)物記錄10個(gè)時(shí)間單位。②手針左側(cè)足三里(大鼠后肢膝關(guān)節(jié)外下方當(dāng)腓骨小頭下約5mm處)，直刺5～7mm，留針。用適當(dāng)?shù)牧Χ忍岵迥磙D(zhuǎn)(平補(bǔ)平瀉法)2min后停止手針，開(kāi)始記錄。以停止手針后2min為一個(gè)時(shí)間單位進(jìn)行記錄，之后休息5mi

8、n待其恢復(fù)到基線水平，重復(fù)手針刺激，再次以停止手針后2min為一個(gè)時(shí)間單位進(jìn)行記錄，如此重復(fù)進(jìn)行記錄，每只動(dòng)物記錄10個(gè)時(shí)間單位。每只動(dòng)物做非穴位(旁開(kāi)5mm處)對(duì)照，也以2min為一個(gè)時(shí)間單位，記錄10個(gè)時(shí)間單位。③休息約30分鐘，待動(dòng)物恢復(fù)到正常的放電水平時(shí)，將針連接電子刺激器，設(shè)置好參數(shù)后(方式：正電流刺激，模式：連續(xù)單刺激，強(qiáng)度0.5mA，波寬：5ms，頻率：20Hz)，刺激2min后停止，開(kāi)始記錄。以停止電針后2min為一個(gè)時(shí)

9、間單位進(jìn)行記錄，之后休息5min，重復(fù)電針刺激，再次以停止電針后2min為一個(gè)時(shí)間單位進(jìn)行記錄，如此重復(fù)進(jìn)行記錄，每只動(dòng)物記錄10個(gè)時(shí)間單位。每只動(dòng)物做非穴位(旁開(kāi)5mm處)對(duì)照，也記錄10個(gè)時(shí)間單位。在以上記錄過(guò)程中應(yīng)隨時(shí)補(bǔ)充38℃的溫石蠟油保持脊髓濕潤(rùn)，維持動(dòng)物直腸溫度在37～38℃，保持安靜，以減少周?chē)h(huán)境的干擾。每只動(dòng)物記錄時(shí)，步驟②和③隨機(jī)互換順序。每只動(dòng)物記錄完畢后進(jìn)行組織學(xué)定位，對(duì)于不符合要求的數(shù)據(jù)不予統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果

10、：本實(shí)驗(yàn)以放電波幅超過(guò)基線的20﹪為判斷標(biāo)準(zhǔn)，超過(guò)20﹪計(jì)為放電一次，共記錄到30個(gè)神經(jīng)元放電符合標(biāo)準(zhǔn)。統(tǒng)計(jì)每個(gè)時(shí)間單位(2min)的放電次數(shù)。因?yàn)榉烹姶螖?shù)為計(jì)量資料，所以用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示。統(tǒng)計(jì)每個(gè)記錄點(diǎn)在五個(gè)時(shí)相(對(duì)照A、手針B、手針?lè)茄ㄎ籆、電針D、電針?lè)茄ㄎ籈)的放電次數(shù)，作方差分析，每組數(shù)據(jù)與對(duì)照A進(jìn)行比較、手針B和電針D進(jìn)行比較、手針B和手針?lè)茄ㄎ籆進(jìn)行比較、電針D和電針?lè)茄ㄎ籈進(jìn)行比較，放電次數(shù)顯著減少的為抑制，增多為興

11、奮。 手針B與對(duì)照A比較，表現(xiàn)為興奮的有18個(gè)(60﹪)，抑制的有5個(gè)(16.67﹪)，無(wú)顯著差異的有7個(gè)(23.33﹪)；手針?lè)茄ㄎ籆與對(duì)照A比較，表現(xiàn)為興奮的有17個(gè)(56.67﹪)，抑制的有3個(gè)(10﹪)，無(wú)顯著差異的有10個(gè)(33.33﹪)；電針D與對(duì)照A比較，表現(xiàn)為興奮的有17個(gè)(56.67﹪)，抑制的有5個(gè)(16.67﹪)，無(wú)顯著差異的有8個(gè)(26.67﹪)；電針?lè)茄ㄎ籈與對(duì)照A比較，表現(xiàn)為興奮的有17個(gè)(56.67

12、﹪)，抑制的有2個(gè)(6.67﹪)，無(wú)顯著差異的有11個(gè)(36.67﹪)；手針B與手針?lè)茄ㄎ籆比較，手針穴位效果明顯的有15個(gè)(53.33﹪)，手針?lè)茄ㄎ恍Ч黠@的有2個(gè)(10﹪)，無(wú)顯著差異的有13個(gè)(36.67﹪)；手針B與電針D比較，手針效果明顯的有16個(gè)(53.34﹪)，電針效果明顯的有3個(gè)(10﹪)，無(wú)顯著差異的有11個(gè)(36.67﹪)；電針D與電針?lè)茄ㄎ籈比較，電針穴位效果明顯的有2個(gè)(6.67﹪)，電針?lè)茄ㄎ恍Ч黠@的有6個(gè)

13、(20﹪)，無(wú)顯著差異的有22個(gè)(73.33﹪)。 以上結(jié)果表明，手針和電針足三里都能明顯興奮腰髓背角神經(jīng)元，使其放電頻率升高(P＜0.05)；手針和電針?lè)茄ㄎ坏男?yīng)也是以興奮為主；手針和電針比較，手針的興奮作用大于電針(P＜0.05)；手針穴位與非穴位相比有顯著的差異(P＜0.05)，而電針穴位與非穴位相比沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。 結(jié)論：1手針和電針刺激足三里都能使腰髓背角神經(jīng)元放電頻率顯著增加。 2手針

14、和電針相比，手針的興奮作用強(qiáng)于電針。 3穴位與非穴位相比具有相對(duì)特異件。 2形態(tài)學(xué)研究新生大鼠腰髓背根節(jié)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)研究方法：新生Wistar大鼠12只，雌雄不拘，于生后第3天冷凍麻醉，進(jìn)行灌流取材。左心室插管，先注入30﹪枸櫞酸鈉溶液5ml后，再繼續(xù)灌入2﹪多聚甲醛(溶于0.1M磷酸鹽緩沖液，pH7.2-7.4)30ml，預(yù)冷在0℃～4℃的條件下進(jìn)行灌注。灌注完畢后將動(dòng)物整體后固定2～3h，再用加入5﹪蔗糖的磷酸鹽緩

15、沖液沖洗3次，入冰箱4℃過(guò)夜。整體冰凍連續(xù)切片，切片厚度40μm，切片用中性紅染色。通過(guò)顯微鏡(NikonE600)和ImagePro軟件觀察連續(xù)腰髓脊神經(jīng)節(jié)的形態(tài)，統(tǒng)計(jì)各種形態(tài)細(xì)胞的數(shù)量和大小。計(jì)算方法用如下公式，計(jì)算到的各種細(xì)胞數(shù)用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示。 神經(jīng)節(jié)細(xì)胞總數(shù)=該神經(jīng)節(jié)所有切片的細(xì)胞數(shù)之和×(切片厚度μm÷細(xì)胞平均直徑μm)結(jié)果：背根節(jié)細(xì)胞分大、中、小三種類型，顯微鏡下脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)的細(xì)胞形態(tài)多為圓形，胞漿呈均勻的淡紅

16、色，細(xì)胞核不著色。大細(xì)胞較多，直徑20～30μm，占細(xì)胞標(biāo)記總數(shù)的43﹪；中等大小的細(xì)胞，直徑10～20μm，數(shù)量次之(占36﹪)；小細(xì)胞較少，直徑＜10μm，(占21﹪)。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)，大細(xì)胞的平均直徑：28.24±3.26μm；中細(xì)胞平均直徑17.36±2.38μm；小細(xì)胞平均直徑：7.08±0.96μm，n=10。 通過(guò)對(duì)6例腰髓脊神經(jīng)節(jié)連續(xù)冰凍切片的觀察，得到每個(gè)神經(jīng)節(jié)內(nèi)三種細(xì)胞的總數(shù)：大型細(xì)胞946.83±118.51，中