VE-cadherin在非小細胞肺癌血管生成中的體外實驗研究.pdf

1、目的:血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)是特異性表達于血管內(nèi)皮細胞的一類細胞黏附分子，是血管形成過程中不可缺少的。本研究旨在探討血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)在非小細胞肺癌(NSCLC)血管生成中的作用，并分析其與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)之間的相關(guān)性，為NSCLC的抗血管生成治療提供新的靶點和實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.VE-cadherin在NSCLC中的表達及其意義:應用免疫組化SP法

2、檢測72例NSCLC組織及相應癌旁正常組織VE-cadherin蛋白的表達情況;其中34例用實時定量PCR法檢測mRNA的表達情況;并以VEGF為陽性參照。
　　 2.VE-cadherin表達下調(diào)對A549細胞增殖、周期及凋亡的影響:實驗分為空白對照組、干擾組及陰性對照組，設計VE-cadherin-siRNA，瞬時轉(zhuǎn)染A549細胞，實時定量PCR法和Western blotting法檢測VE-cadherin在各組表達量的變

3、化;MTS比色法檢測A549細胞的增殖情況;FCM檢測細胞周期及凋亡。
　　 3.VE-cadherin表達下調(diào)的A549細胞上清液對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)增殖、周期、凋亡及小管形成的影響:收集上述各組轉(zhuǎn)染72 h后的細胞上清液，用ELISA法檢測上清液中VE-cadherin的表達情況;并分析上清液對HUVECs增殖、周期、凋亡及Matrigel小管形成的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.72例NSCL

4、C組織癌細胞和血管內(nèi)皮細胞VE-cadherin蛋白的陽性表達率分別為69.4％、52.8％，均顯著高于對應癌旁正常組織肺泡上皮細胞0％和血管內(nèi)皮細胞20.8％;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達量均顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組;Ⅲ-Ⅳ期的陽性表達率均顯著高于Ⅰ-Ⅱ期。
　　 2.VEGF蛋白在NSCLC組織癌細胞和血管內(nèi)皮細胞中的陽性表達率分別為84.7％、62.5％，均顯著高于對應的癌旁正常組織肺泡上皮細胞16.7％和血管內(nèi)皮細胞29.2％。

5、
　　 3.經(jīng)實時定量PCR分析，VE-cadherin mRNA在癌組織和癌旁正常組織中的相對表達量分別為1.15±0.87、0.70±0.57; VEGFmRNA的相對表達量分別為1.39±1.17、0.79±0.65。
　　 4.VE-cadherin和VEGF在蛋白水平和mRNA水平均呈正相關(guān)。
　　 5.干擾組VE-cadherin mRNA的表達量(0.299±0.039)明顯低于空白對照組(1.13

6、7±0.082)和陰性對照組(1.001±0.076);干擾組VE-cadherin蛋白的表達量(0.297±0.045)明顯低于空白對照組(0.833±0.119)和陰性對照組(0.794±0.095)。
　　 6.三組對A549細胞增殖、周期及凋亡的差異無統(tǒng)計學意義。
　　 7.轉(zhuǎn)染A549細胞72 h后，干擾組上清液VE-cadherin的表達量(2.89±0.07)ng/mL明顯低于空白對照組(11.43±0.0

7、9) ng/mL和陰性對照組(11.15±0.04)ng/mL，而后兩組間表達量差異無統(tǒng)計學意義。
　　 8.干擾組與陰性對照組上清液對HUVECs周期各期的差異無統(tǒng)計學意義。
　　 9.干擾組上清液明顯抑制了HUVECs的增殖，24 h、48 h、72 h的抑制率分別為29.2％、33.8％、30.1％。
　　 10.加干擾組上清液的HUVECs凋亡率為(27.12±5.22)％，顯著高于加陰性對照組上清液(1

8、3.43±3.50)％。
　　 11.加干擾組上清液的HUVECs小管形成數(shù)為1.53±0.31，顯著低于陰性對照組(14.53±1.51)。
　　 結(jié)論:
　　 1.VE-cadherin和VEGF在NSCLC組織癌細胞和血管內(nèi)皮細胞中均高表達，且二者的表達具有正相關(guān)，提示VE-cadherin可能在NSCLC血管生成中起重要作用，且可能與VEGF具有協(xié)同作用。
　　 2.VE-cadherin-siR

9、NA可有效抑制VE-cadherin住肺癌細胞株A549中的表達，為NSCLC抗血管生成治療提供了新的靶點和方法。
　　 3.VE-cadherin-siRNA瞬時轉(zhuǎn)染A549細胞株后，不能影響其生物學行為，提示VE-cadherin可能不是直接作用于癌細胞，而是通過其他機制來參與NSCLC的發(fā)生發(fā)展。
　　 4.由A549細胞分泌的VE-cadherin對HUVECs有促增殖和抗凋亡的作用，而對其周期無影響，表明VE-