酸性鞘磷脂酶調(diào)節(jié)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路在吳茱萸堿誘導(dǎo)的胃癌SGC-701細(xì)胞凋亡中的作用.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:明確在吳茱萸堿誘導(dǎo)的胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡中起作用的鞘磷脂酶及其調(diào)節(jié)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路在此凋亡中的作用;明確吳茱萸堿誘導(dǎo)胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡的作用及對(duì)caspase3、caspase8、caspase9蛋白表達(dá)的影響。
  方法:體外培養(yǎng)人胃癌 SGC-7901及 BGC-823細(xì)胞,根據(jù)不同的干預(yù)方法設(shè)置的各組分別作用于SGC-7901細(xì)胞24h及不同濃度吳茱萸堿作用BGC-823細(xì)胞24h、36h及48h后

2、:①CCK8比色法觀察對(duì)兩種細(xì)胞的細(xì)胞毒作用;②Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩種細(xì)胞的凋亡率;PI單染檢測(cè) BGC-823細(xì)胞的周期變化;③電鏡觀察SGC-7901細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)變化;④Real-time PCR檢測(cè)SGC-7901中JNK、CHOP、Caspase4基因的表達(dá)情況,采用β-actin作內(nèi)參;⑤western Blotting檢測(cè)SGC-7901細(xì)胞中的JNK、p-JNK、CHOP、Caspas

3、e4及BGC-823細(xì)胞中caspase3、caspase8、caspase9的蛋白表達(dá)情況,β-actin為內(nèi)參。
  結(jié)果:①CCK8和Annexin V-FITC/PI雙染結(jié)果顯示:吳茱萸堿可誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡,100μM D609能阻滯此凋亡作用;30μM內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑Salubrinal亦能抑制此凋亡作用;吳茱萸堿可以誘導(dǎo) BGC-823細(xì)胞凋亡(半數(shù)抑制濃度為20μM),且誘導(dǎo)的凋亡隨時(shí)間和劑量的增加而增強(qiáng)

4、;②PI單染結(jié)果顯示:吳茱萸堿影響了BGC-823細(xì)胞的周期分布,使其阻滯于G0/G1期;③電鏡結(jié)果顯示:1.5μM吳茱萸堿單獨(dú)作用SGC-7901細(xì)胞后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顯著擴(kuò)張;與D609同時(shí)作用組,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無(wú)明顯改變;④Real-time PCR結(jié)果顯示:吳茱萸堿作用組中,SGC-7901細(xì)胞內(nèi)的JNK、CHOP、Caspase4基因表達(dá)上調(diào);與D609同時(shí)作用后,JNK、CHOP、caspase4基因表達(dá)下調(diào),差異顯著(P?0.05);⑤W

5、estern blotting結(jié)果顯示:吳茱萸堿可使胃癌 SGC-7901細(xì)胞內(nèi)的p-JNK、CHOP、caspase4蛋白表達(dá)增高;加入D609后,p-JNK、CHOP、caspase4表達(dá)減低,差異顯著(P?0.05);單純D609組與對(duì)照組相比,p-JNK、CHOP、caspase4的表達(dá)無(wú)差異;吳茱萸堿作用BGC-823細(xì)胞24h、36h后caspase3、caspase8、caspase9的表達(dá)上調(diào),作用48h后,caspas

6、e3、caspase8、caspase9的表達(dá)下調(diào)。
  結(jié)論:1.酸性鞘磷脂酶與吳茱萸堿誘導(dǎo)的胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡有關(guān);
  2.酸性鞘磷脂酶可進(jìn)一步活化下游的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路,使p-JNK、CHOP、caspase4蛋白表達(dá)上調(diào)而誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡;
  3.吳茱萸堿可使胃癌BGC-823細(xì)胞的周期阻滯于G0/G1期,并在一定時(shí)間內(nèi)使caspase3、caspase8、caspase9蛋白表達(dá)上

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