牦牛角候選蛋白表達(dá)及生長發(fā)育基因關(guān)聯(lián)分析研究.pdf

1、本試驗(yàn)以牦牛為研究對象，選取3月齡牦牛胎牛角組織，利用免疫組化研究FOXL2、CDH1和OLIG1等角發(fā)育候選蛋白在胎牛角部組織表達(dá)的定位;利用DNA測序技術(shù)和TA克隆篩選了GHR等生長發(fā)育相關(guān)基因;采用ELISA方法測定了牦牛血液中甲狀腺激素(T4)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、生長激素(GH)、胰島素(Ins)和睪酮(T)等激素;利用動(dòng)物血細(xì)胞和血清生化分析儀測定了30項(xiàng)血液生理生化指標(biāo);使用R軟件的pls包，對牦牛4項(xiàng)體尺數(shù)據(jù)和性別

2、、角性狀、基因型、5項(xiàng)激素指標(biāo)和血液生理生化指標(biāo)進(jìn)行偏最小二乘建模。目的在于探索牦牛生長發(fā)育基因與部分體尺性狀有關(guān)的遺傳標(biāo)記位點(diǎn)和篩選牦牛角發(fā)育的候選蛋白，為探討牦牛的生長性能選育和培育無角牦牛新品種積累了基礎(chǔ)資料。研究結(jié)果如下:
　　1、免疫組化結(jié)果顯示:CDH1蛋白在有角、無角角部皮膚中均表達(dá)。在無角牦牛角部表皮和毛囊組織中表達(dá)強(qiáng)于有角牦牛，推測其與角部表皮多層液泡角化細(xì)胞的增殖有關(guān)，可能更多的參與毛囊的發(fā)育;OLIG1蛋白在

3、有角牦牛角部表皮組織中的表達(dá)量高于無角牦牛，在無角牦牛角部毛囊組織中不表達(dá)，推測其更多參與表皮細(xì)胞增殖和表皮多層液泡角化細(xì)胞的的增殖分化;FOXL2蛋白僅在有角牦牛角部表皮組織表達(dá)，在無角牦牛角部皮膚組織中不表達(dá)，推測FOXL2蛋白與角部毛囊組織發(fā)育無關(guān)，與表皮多層液泡角化細(xì)胞的增殖分化有關(guān)。FOXL2蛋白可以作為調(diào)控牦牛角發(fā)育的候選蛋白。
　　2、試驗(yàn)檢測了1歲齡有角、無角牦牛群體的30項(xiàng)血液生理生化指標(biāo)、5項(xiàng)激素水平和4項(xiàng)體尺

4、數(shù)據(jù)。結(jié)果表明兩群體間體尺、激素水平差異不顯著(P＞0.05)，11項(xiàng)生理生化指標(biāo)差異極顯著(P＜0.01)，5項(xiàng)生理生化指標(biāo)差異顯著(P＜0.05)。初步發(fā)現(xiàn)有角牦牛與無角牦牛在高原低氧適應(yīng)、肝代謝、腎代謝以及骨質(zhì)形成方面存在一定差異。
　　3、測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)GHR基因第7內(nèi)含子缺失3bp堿基，實(shí)驗(yàn)群體大多數(shù)為GHR基因野生型，與野牦牛(Bos mutus)基因型一致。突變型個(gè)體與瘤牛、家牛、水牛、芬蘭艾爾郡乳牛和山羊基因型一致。

5、復(fù)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)GHR基因型與白細(xì)胞、總蛋白、白蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶、葡萄糖、總膽固醇等顯著相關(guān)(P＜0.05)，與乳酸脫氫酶存在極顯著相關(guān)(P＜0.01)。因此GHR基因該位點(diǎn)的插入缺失可能影響機(jī)體的生長發(fā)育、免疫，以及機(jī)體對低氧環(huán)境的適應(yīng)性。
　　4、通過R軟件pls包，以體重、體高、體斜長和胸圍作為因變量，對牦牛生長性狀與性別、角型、基因型、生長激素和血液生理生化指標(biāo)進(jìn)行偏最小二乘的建模。對于體重，選取主成分為8個(gè)，發(fā)現(xiàn)對