膀胱移行細胞癌尿脫落細胞中細胞角蛋白-20-19基因表達研究.pdf

1、浙江大學碩士學位論文膀胱移行細胞癌尿脫落細胞中細胞角蛋白2019基因表達研究姓名：許先國申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：趙魯杭2001.5.1測，同時利用在膀胱上皮細胞中表達的CKl9作實驗對照廠目的：目前TCC的術(shù)前診斷方法主要有尿脫落細胞鏡檢和膀胱鏡法，前者靈敏度和特異性低，而后者對受檢者造成的創(chuàng)傷較大。本實驗利用尿液中自然脫落的細胞進行分子檢測，旨在建立一種高靈敏度、高特異性、_■●■_。。?！粺o創(chuàng)傷性的T

2、CC診斷檢測技術(shù)。／材料和方法：L1分別留取43例經(jīng)膀胱鏡檢查為膀胱腫瘤的術(shù)前患者和17例健康志愿者尿液，離心收集尿脫落細胞，迅速提取細胞中的總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成eDNA，設計針對CKl9和CK20基因的特異引物，對同一eDNA標本進行PCR擴增，2％瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產(chǎn)物，根據(jù)不同引物的PCR反應體系中是否含有目的擴增片段(CK20對應370bp，CKl9對應214bp)而初步判斷實驗標本的CKl9／CK20表達模式。2隨機

3、抽取CKl9和CK20陽性、陰性擴增產(chǎn)物各2例，經(jīng)初步純化后，按末端終止法原理作測序PCR反應，產(chǎn)物經(jīng)純化后以5％聚丙烯酰胺凝膠電泳在ABl37796測序儀上作DNA序列分析，正反測序結(jié)果比對后得出RTPCR產(chǎn)物序列。3將RTPCR檢測結(jié)果與腫瘤組織病理切片和膀胱鏡檢結(jié)果進行比較，評價CK20RTPCR法檢測TCC的可行性：對正常人、非TCC和TCC組CK20陽性作統(tǒng)計分析，觀察3組標本的CK20表達模式：將DNA序列分析結(jié)果與人類CK

4、J9、CK20基因庫(美國國立衛(wèi)生研究院圈書館：wwwncbinlmnihgov)數(shù)據(jù)對照，驗證RTPCR產(chǎn)物的特異性。結(jié)果：13個實驗組CKl9全部表達，而CK20陽性率正常人組為0％，非TCC患者組為59％，TCC患者組為885％。TCC組陽性率明顯高于正常人和非TCC組(x。=450、P050)。CK20RTPCR法與膀胱鏡法在檢測TCC上有顯著性差異(xo=170尸050和x2=O016P099)。在病理結(jié)果證實為TCC的26例