心肌細(xì)胞肥大過程中心臟發(fā)育相關(guān)基因的時序性表達(dá)模式研究.pdf

1、目的：觀察在心肌細(xì)胞肥大過程中相關(guān)基因時序性表達(dá)規(guī)律，與心臟發(fā)育過程中相關(guān)規(guī)律進(jìn)行對比，為心肌細(xì)胞肥大機制研究及治療提供線索。
　　方法：選擇出生1-3天的昆明乳鼠進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)，用異丙腎上腺素（ISO）干預(yù)心肌細(xì)胞，用CCK-8、細(xì)胞計數(shù)儀、細(xì)胞免疫組化分別檢測心肌細(xì)胞存活率、平均直徑及表面積，篩選出構(gòu)建模型的最佳ISO濃度。用RT-PCR、Western Blot分別檢測相關(guān)基因mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：

2、用不同濃度ISO干預(yù)心肌細(xì)胞48h后細(xì)胞體積在隨濃度濃度增加體積稍增大，到5μmol/L時達(dá)峰值（P＜0.05），后體積稍有減小(P＞0.05)。不同濃度ISO干預(yù)心肌細(xì)胞48h后，各組細(xì)胞存活率較正常對照組無明顯變化（P＞0.05），但20μmol/L組細(xì)胞存活率明顯低于5μmol/L及10μmol/L組（P＜0.05）。5μmol/L ISO干預(yù)心肌細(xì)胞48h細(xì)胞表面積較正常對照組明顯增大（P＜0.05）。5μmol/L ISO干預(yù)

3、后，GATA4、MEF2C、GATA5、BNP、ANP于24h，P300、α-MHC、TBX5于12h，SRF、β-MHC mRNA于6h開始升高（P＜0.05）；其中GATA4、SRF、MEF2C、α-MHC、β-MHC、P300 mRNA表達(dá)呈先升后降的趨勢，至干預(yù)72h GATA4、SRF、α-MHC、β-MHC、P300 mRNA表達(dá)仍高于正常（P＜0.05），而MEF2C降至正常(P＞0.05)；GATA5、TBX5、ANP、

4、BNP mRNA表達(dá)與正常對照組相比持續(xù)升高（P＜0.05），而NKX2.5 mRNA無明顯變化(P＞0.05)。ISO干預(yù)48h后，GATA4、HEY2蛋白表達(dá)水平分別升高、降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論：根據(jù)細(xì)胞體積、細(xì)胞存活率、細(xì)胞表面積及肥大基因的表達(dá)結(jié)果提示心肌細(xì)胞肥大模型構(gòu)建成功。在該心肌細(xì)胞肥大模型中，MEF2C的時序表達(dá)規(guī)律與心臟發(fā)育過程相似，而 GATA4、GATA5、SRF、TBX5的時序性表達(dá)規(guī)律與心臟發(fā)育