香蘭素分子反向虛擬篩選及經(jīng)吸嗅抗抑郁機(jī)制探討.pdf

1、研究背景及目的：
　　MDD的干預(yù)目前主要采用5-HT再攝取抑制劑（SSRI)等抗抑郁藥物。在肯定這些新型抗抑郁藥研究成果的同時(shí),其療效、毒副作用及給藥途徑等依然需要研究者的繼續(xù)改進(jìn)。香蘭素分子具有奶香的氣息,是被廣泛使用的可食用香料。研究顯示香蘭素具有抗焦慮、抗菌、抗氧化等作用。自然界及人體內(nèi)香蘭素有哪些蛋白作用靶點(diǎn)?
　　由于嗅覺(jué)通路與情感中樞杏仁核、海馬等有廣泛的纖維聯(lián)系,這成為嗅覺(jué)通路調(diào)節(jié)情感中樞的理論基礎(chǔ),經(jīng)嗅覺(jué)通

2、路對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行干預(yù)的報(bào)道也越來(lái)越多。嗅覺(jué)通的給藥途徑起效迅速、無(wú)外周毒、副作用、途徑方便。香蘭素分子“令人愉快”的氣味對(duì) MDD患者能否起到干預(yù)作用,其機(jī)制是什么?
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)計(jì)算機(jī)反向虛擬篩選,探討香蘭素可能作用的蛋白晶體,并通過(guò)讓 MDD大鼠吸嗅含香蘭素的氣霧劑,研究香蘭素吸嗅的抗抑郁作用及機(jī)制。
　　第一部分，香蘭素分子藥用靶標(biāo)計(jì)算機(jī)反向虛擬篩選
　　藥物與蛋白質(zhì)分子(受體)的結(jié)合類似于鑰匙與鎖的識(shí)別關(guān)系。

3、為了探討香蘭素可能作用的受體蛋白,利用分子對(duì)接軟件 Surflex對(duì)sc-PDB蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行反向虛擬篩選,軟件對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行打分,打分結(jié)果大于8分的說(shuō)明與靶標(biāo)有較大的相關(guān)性,分值越高的蛋白與香蘭素分子的相關(guān)性也就越高,這種虛擬篩選為香蘭素的作用受體的研究及藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)提供了指導(dǎo)意義。
　　結(jié)果：
　　篩選出來(lái)的大于8分的蛋白晶體為:羧乙基精氨酸β-內(nèi)酰胺酶、金屬β內(nèi)酰胺酶、結(jié)合分支桿菌水楊酸合成酶、β內(nèi)酰胺酶（IMP-1

4、)。打分前20位的蛋白晶體見(jiàn)表3-1。篩選結(jié)果與香蘭素抗菌、抗氧化作用的報(bào)道基本一致。
　　第二部分，MDD大鼠吸嗅香蘭素神經(jīng)行為學(xué)觀察
　　CUMS+孤養(yǎng)的方法建立大鼠 MDD模型。根據(jù)干預(yù)的方式將建模成功后的大鼠分為:香蘭素吸嗅組、氟西汀灌胃組、純水吸嗅組,以及 OBX+香蘭素吸嗅組和假手術(shù)組（Sham)。每組大鼠給予相應(yīng)的干預(yù)4w,觀察4w后各組大鼠糖水消耗量、強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間較干預(yù)前的變化。
　　結(jié)果：

5、　　與干預(yù)前相比,干預(yù)4w后香蘭素吸嗅組和氟西汀灌胃組大鼠FST不動(dòng)時(shí)間、SCT糖水消耗有顯著性差異;純水吸嗅組和OBX+香蘭素吸嗅組未見(jiàn)顯著性差異。
　　第三部分，香蘭素吸嗅對(duì)大鼠腦內(nèi)5-HT、DA、NE濃度的影響
　　神經(jīng)行為學(xué)的觀察結(jié)果顯示,香蘭素能經(jīng)嗅覺(jué)通路改善大鼠的抑郁樣行為。為了探索其作用機(jī)制,將大鼠麻醉處死后取腦,通過(guò)UPLC-FLR(超高壓液相色譜-熒光檢測(cè)器)檢測(cè)各組大鼠腦勻漿液內(nèi)5-HT、DA、NE量,并

6、通過(guò)蛋白試劑盒（BCA protein assay kits)檢測(cè)各組大鼠腦勻漿液可溶性蛋白含量（Pr)作為內(nèi)標(biāo)。
　　結(jié)果：
　　香蘭素吸嗅組和氟西汀灌胃組大鼠腦勻漿液5-HT、DA的量顯著高于純水吸嗅組,而 NE未見(jiàn)顯著性差異。OBX+香蘭素吸嗅組大鼠腦勻漿液5-HT、DA、NE均顯著低于 Sham組。
　　結(jié)論：
　　1.香蘭素反向虛擬篩選的結(jié)果與其抑菌、抗氧化等報(bào)道一致。
　　2.香蘭素吸嗅能改善