針對原發(fā)性肝癌的新型重組腺病毒基因治療.pdf

1、在該課題的研究中作者構(gòu)建了一系列條件復(fù)制性腺病毒載體,其主要特征是刪除了5型腺病毒E1區(qū)基因,代之以經(jīng)過結(jié)構(gòu)優(yōu)化的甲胎蛋白啟動子基因,在其上游插入基因調(diào)節(jié)序列HS4,在其下游插入腺病毒的E1A基因、報告基因AP或治療基因TRAIL,這些插入的外源基因的表達(dá)由隔離子和甲胎蛋白啟動子共同治療基因TRAIL,這些插入的外源基因的表達(dá)由隔離子和甲胎蛋白啟動子共同調(diào)控.通過這一系列的重組腺病毒載體,研究E1A基因在溶瘤性腺病毒載體中的作用,研究由

2、甲胎蛋白啟動子調(diào)控的溶瘤性腺病毒載體對表達(dá)甲胎蛋白的原發(fā)性肝癌細(xì)胞的特異性殺傷作用,研究上游調(diào)控基因?qū)ν庠磫幼拥奶禺愋约皢踊钚缘恼{(diào)控作用,研究由腫瘤特異性的溶瘤性腺病毒載體表達(dá)治療性基因?qū)δ[瘤細(xì)胞的特異性治療作用.為研究E1A基因在溶瘤性腺病毒載體中的作用,構(gòu)建了Ad.IR-AP載體和Ad.IR/E1A病毒,將Ad.IR-AP/E1A病毒通過靜脈給藥方式注射入荷瘤動物體內(nèi),結(jié)果顯示E1A基因的表達(dá)可以有效的促進(jìn)腺病毒載體在腫瘤細(xì)胞中

3、的復(fù)制與病毒在腫瘤細(xì)胞間的播散.為研究甲胎蛋白啟動子調(diào)控的腺病毒載體在分泌甲胎蛋白的原發(fā)性肝癌細(xì)胞中特異性表達(dá)目標(biāo)基因,以及基因調(diào)節(jié)序列隔離子HS4序列對甲胎蛋白啟動子特異性的調(diào)控,構(gòu)建了Ad.AFP-AP和Ad.HS4.AFP-AP病毒載體.結(jié)果表明,在表達(dá)甲胎蛋白的原發(fā)性肝癌細(xì)胞中,由AFP啟動子調(diào)控的腺病毒特異性的表達(dá)報告基因AP,而在AFP啟動子之前插入隔離子HS4序列可以增強(qiáng)重組病毒針對表達(dá)甲胎蛋白的原發(fā)性肝癌的特異性.結(jié)合以

4、上研究結(jié)果,構(gòu)建了具有治療用意義的重組溶瘤腺病毒載體Ad.HS4.AFP.E1A/TRAIL,利用特異性針對表達(dá)甲胎蛋白的原發(fā)性肝癌細(xì)胞的容瘤腺病毒載體表達(dá)治療基因TRAIL,以達(dá)到增強(qiáng)治療原發(fā)性肝癌的特異性及有效性的目的.研究結(jié)果表明,Ad.HS4.AFP.E1A/TRAIL溶瘤病毒具有針對表達(dá)甲胎蛋白的原發(fā)性肝癌的特異性,在體外細(xì)胞及動物體內(nèi)腫瘤模型中都可以特異性殺傷腫瘤細(xì)胞.該研究探索了利用異源的腫瘤特異性啟動子結(jié)合隔離子等基因轉(zhuǎn)