造血干細(xì)胞移植后人皰疹病毒6型感染的初步研究.pdf

1、造血干細(xì)胞移植(Hematopoietic stem cell transplantation HSCT)是目前治愈血液系統(tǒng)惡性疾病的有效手段,而移植后的病毒感染一直是影響移植成功率和移植受者生活質(zhì)量的主要因素之一.人皰疹病毒6型(human herpesvirus 6HHV-6)是1986年從艾滋病和淋巴增生異?；颊唧w內(nèi)分離出的一種新型的皰疹病毒,屬人皰疹病毒科,β病毒亞科,是雙鏈DNA病毒,有兩種亞型:HHV-6A型和HHV-6B型

2、.HHV-6是一種普遍存在的病原體,在人群中的感染率較高,初次感染大多導(dǎo)致幼兒急疹.在初次感染后,往往會潛伏在外周血單個核細(xì)胞、唾液腺等部位,當(dāng)機(jī)體免疫功能受到抑制時重新激活復(fù)制,導(dǎo)致一系列生理病理改變,具體機(jī)制尚不清楚.近年來HSCT后HHV-6感染的研究成為熱點,國外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)HHV-6感染或激活一般出現(xiàn)在移植后早期,發(fā)生率在45﹪～75﹪之間,并發(fā)現(xiàn)HHV-6的感染與移植后造血重建延遲、急性移植物抗宿主反應(yīng)密切相關(guān),可導(dǎo)致中樞神

3、經(jīng)系統(tǒng)的感染.但國內(nèi)有關(guān)HSCT患者HHV-6感染的報道甚少.本實驗對在本移植中心接受HSCT患者HHV-6的感染率進(jìn)行了研究,同時建立一種方便、快速、適合臨床檢驗HHV-6的方法. 本研究采用巢式PCR定性檢測19例HSCI、后患者外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和40例HSCT后患者外周血漿HHV-6的感染,并結(jié)合限制性核酸內(nèi)切酶酶切分型對HHV-6 A型和

4、B型進(jìn)行了分析.研究同時設(shè)正常對照組(50例正常志愿者標(biāo)本)和疾病對照組(15例血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者化療前標(biāo)本).結(jié)果顯示本組正常人群HHV-6的檢出率為66﹪,均為HHV-6B型感染,主要為PBMCs的潛伏感染;血漿中病毒檢出率較低,只有6﹪.疾病對照組結(jié)果顯示15例患者PBMCs的HHV-6檢出率為60﹪,血漿中沒有檢測到HHV-6DNA.HSCT前19例患者PBMCs HHV-6的檢出率為58﹪,HSCT后患者PBMCs HHV-

5、6檢出率為68﹪.HSCT前40例患者血漿HHV-6檢出率為2.5﹪,HSCT后患者血漿HHV-6的檢出率為42.5﹪,較移植前明顯提高,有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P(0.01).HSCT后血漿HHV-6的感染率同正常對照和疾病對照血漿HHV-6的檢出率相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P(0.05).在定性檢測的基礎(chǔ)上,研究建立了實時定量PCR檢測HHV-6 DNA的方法,對正常對照、疾病對照及40例HSCT患者血漿中HHV-6的病毒拷貝數(shù)進(jìn)行了檢測,

6、 結(jié)果：顯示50例正常對照組HHV一6的檢出率為6﹪,平均病毒拷貝數(shù)為828±317.5copes/ml.15例疾病對照組沒有檢出HHV-6 DNA.40例患者HSCT前只有一例檢出血漿HHV-6DNA,拷貝數(shù)為420copes/ml.40例患者HSCT后有18例(45﹪)檢出HHV-6DNA,病毒平均拷貝數(shù)為4884.4±374.4 copes/ml,明顯高于正常對照組的病毒拷貝數(shù),檢出HHV-6的中位時間為移植后14.5天(0～2

7、3天).40例HSCI、患者中有14例(35﹪)發(fā)生I～Ⅳ度aGVHD,中位時間為第20(8～40)天.HNV-6檢出的中位時間明顯早于aGVHD發(fā)生的時間(P(0.05).14例I～Ⅳ度aGVHD患者中有11例(78﹪)檢出了HNV-6,3例(21.4﹪)沒有檢出HHV-6, I～Ⅳ度aGVHD患者HHV-6檢出率明顯高于無GVHD患者(P(0.05). 1、本組健康成人中HHV-6的檢出為66﹪,均為HHV-6B型感染.

8、 2、HSCT患者PBMCs HHV-6檢出率為68﹪,血漿HHV-6檢出率為45﹪,均為HHV-6B型感染.HSCT后血漿中HHV-6DNA拷貝數(shù)較移植前明顯增高,較正常對照組相比也明顯增高(差異有統(tǒng)計學(xué)意義). 3、HSCT后患者血漿HHV-6的激活主要集中在移植后2-4周,且主要為HHV-6B型感染. 4、HSCT后患者HHV-6的感染可能參加了移植后aGVHD的病理過程 5、本研究建立的實時定量PCR