RAS阻斷劑對兔主動脈粥樣硬化病變內VEGF表達的影響.pdf

1、研究背景： 作為目前所知的唯一特異性內皮細胞有絲分裂原，血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)一直是缺血性心血管領域的研究熱點。VEGF促進心肌或肢體缺血組織新生血管及側支循環(huán)形成，對預防動脈管腔急性閉塞所引起的組織壞死具有重要意義。然而，越來越多的證據(jù)表明，粥樣病變中過度表達的VEGF通過介導內膜炎癥反應和血管新生，加劇粥樣硬化的進展，降低斑塊的穩(wěn)定性，而他汀等抗粥樣

2、硬化藥物能下調VEGF的表達。抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensin system，RAS)的藥物，如血管緊張素轉換酶抑制劑(Angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI)和血管緊張素受體拮抗劑(Angiotensin receptor blocker，ARB)具有抗動脈粥樣硬化效應，但它們是否影響粥樣病變中VEGF的表達，尚未見明確報道。 研究目的： 本

3、研究通過高脂喂養(yǎng)建立兔動脈粥樣硬化模型，觀察血管緊張素轉換酶抑制劑培哚普利(perindopril)和血管緊張素受體拮抗劑替米沙坦(telmisartan)對胸主動脈粥樣硬化病變中VEGF mRNA和蛋白表達的影響，以及它們對外周血清中VEGF水平和斑塊形成的影響，探討ACEI及ARB抗粥樣硬化的新機制，為臨床實踐提供新的理論依據(jù)。研究方法： 28只雄性新西蘭大白兔，隨機分為4組：正常對照組(NL)、粥樣硬化模型組(AM)、培哚

4、普利治療組(PT)和替米沙坦治療組(TT)，每組各7只。NL組予普通飼料，其余各組予高脂飼料(含1﹪膽固醇、8﹪豬油、91﹪普通飼料)，均喂養(yǎng)12周。此外PT組和TT組于第9周起分別予培哚普利0.3mg/(kg·d)、替米沙坦3mg/(kg·d)灌胃至實驗結束。12周末，耳中央動脈采血，檢測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的濃度。收集胸主動脈，中性甲醛固定，石蠟

5、包埋切片，HE染色觀察斑塊形態(tài)，圖像分析軟件分析殘存管腔面積比、內膜與中膜厚度比(IT/MT)、內膜與中膜面積比(IA/MA)。RT-PCR法檢測胸主動脈VEGF mRNA的表達。免疫組織化學法觀察血管壁VEGF蛋白的表達，圖像分析軟件分析內膜VEGF陽性染色面積比和平均光密度值。ELISA法測定耳中央動脈血清VEGF濃度。所有計量資料均用均數(shù)士標準差(x±s)表示。4組間比較用單因素方差分析，2組間比較用LSD-t檢驗，P<0.05為

6、有統(tǒng)計學差異。結果用SPSS ForWindows10.0統(tǒng)計軟件處理。 結果： 1.培哚普利、替米沙坦對兔血脂水平的影響AM組、PT組和TT組血清各脂質(TC、TG、LDL-C和HDL-C)水平均顯著高于NL組(P<0.05)，但3組問各脂質水平差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2.胸主動脈形態(tài)學改變光鏡下見NL組動脈層次結構清晰，內彈力板表面僅覆蓋單層內皮細胞，未見內膜增厚及粥樣斑塊形成。AM組見動脈各層

7、交界處模糊，內皮細胞缺損，內膜明顯增厚，各部分厚薄不一，增厚內膜以大量泡沫細胞為主，見散在平滑肌細胞，未見脂質核心和纖維帽形成，相當于美國心臟病協(xié)會病理分型II型改變。 PT組和TT組內膜病變程度較模型組減輕。與NL組(殘存管腔面積比為1±0，IT/MT與IA/MA均近似為0)相比較，AM組、PT組和TT組殘存管腔面積比(分別為0.676±0.020、0.915±0.031和0.899±0.045)均顯著減少(P<0.05)，而

8、IT/MT(分別為2.063±0.406、0.824±0.101和1.004±0.137)、IA/MA(分別為1.902±0.220、0.918±0.203和0.812±0.099)均顯著增加(P<0.05)。PT組和TT組殘存管腔面積比均較AM組增加(P<0.05)，其余兩項指標值均較AM組降低(P<0.05)。而三項指標值在PT組和TT組間的差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 3.培哚普利、替米沙坦對胸主動脈VEGF mR

9、NA表達的影響AM組、PT組和1vr組VEGF mRNA表達(分別為0.751±0.279、0.438±0.203和0.467±0.211)均顯著高于NL組(0.146±0.049)(P<0.05)。與AM組相比，PT組和TT組VEGF mRNA表達均顯著下降(P<0.05)，而PT組和TT組間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 4.培哚普利、替米沙坦對胸主動脈VEGF蛋白表達的影響NL組胸主動脈內膜及中膜均未見VEGF表達，

10、僅外膜見散在、微弱著色。AM組胸主動脈全層均有VEGF蛋白表達，其中以內膜強陽性染色為顯著，VEGF主要表達于泡沫細胞、內皮細胞內以及部分細胞外間質中，中膜內層平滑肌細胞亦有較明顯表達。PT組和TT組VEGF表達較模型組明顯減弱。 圖像分析結果顯示，與NL組(平均光密度值與陽性面積比均近似為0)相比較，AM、PT組和TT組內膜VEGF平均光密度值(分別為0.0388±0.0033、0.0097±0.0016和0.0114±0.0

11、038)和陽性面積比(分別為0.2981±0.0196、0.0890±0.0102和0.1017±0.0273)均顯著增加(P<0.05)。而PT組和TT組兩項指標值均較AM組降低(P<0.05)，PT組與TT組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 5.培哚普利、替米沙坦對兔血清VEGF水平的影響與NL組(17.95±3.29 pg/ml)比較，AM組、PT組和TT組血清VEGF水平(分別為111.83±10.37 pg/m

12、l、50.50±6.87 pg/ml和58.66±9.62 pg/ml)均顯著增高(P<0.05)。與AM組相比，PT組和TT組VEGF水平均顯著降低(P<0.05)，而PT組與TT組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論： 1．正常主動脈內膜無VEGF表達，粥樣硬化內膜VEGF表達顯著增加。 2．培哚普利和替米沙坦能抑制動脈粥樣硬化病變中VEGF m-RNA及蛋白的表達，同時降低外周血中VEGF水平。