一種新型苯乙酮衍生物誘導(dǎo)人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、苯乙酮衍生物近年來(lái)在新型藥劑創(chuàng)制中具有獨(dú)特的地位,其在醫(yī)藥領(lǐng)域表現(xiàn)出良好的生物活性,成為化學(xué)界和生物醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)之一。
　　本研究檢測(cè)了一種新型苯乙酮衍生物1-(4-烯丙氧基-3-羥基)-2-氯苯乙酮作用于HL-60細(xì)胞的毒性,并進(jìn)一步探究了其誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的機(jī)制,結(jié)果如下:
　　(1) MTT法測(cè)試細(xì)胞毒性結(jié)果顯示,該化合物對(duì)HL-60有較強(qiáng)的毒性,作用存在劑量時(shí)間效應(yīng)。化合物作用 HL-60的IC50,在24

2、h和48h時(shí)分別為10.96±1.12μmol/L和7.01±0.14μmol/L。采用吉姆薩染色和Hoechst33258熒光染色進(jìn)一步觀察細(xì)胞形態(tài)及其核變化發(fā)現(xiàn),10、20μmol/L的化合物分別作用HL-60細(xì)胞24h后,細(xì)胞染色質(zhì)凝縮,細(xì)胞核碎裂,多核狀態(tài)明顯,呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡特征。
　　(2) PI染色經(jīng)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期結(jié)果顯示,較低濃度(10μmol/L)化合物作用于HL-60細(xì)胞后,主要將G1和S期細(xì)胞阻滯在G2/

3、M期,有少量細(xì)胞凋亡;濃度提升至20μmol/L時(shí),G2/M期細(xì)胞減少,凋亡細(xì)胞明顯增加。G2/M期阻滯是細(xì)胞DNA損傷激活檢驗(yàn)點(diǎn)的結(jié)果,因此G2/M期周期阻滯可能是化合物引起HL-60細(xì)胞凋亡的途徑之一。
　　(3)通過(guò)DCFH-DA染色法檢測(cè)活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)和試劑盒檢測(cè)GSH和GSSG發(fā)現(xiàn),10和20μmol/L的化合物分別作用6、12、24h時(shí),HL-60細(xì)胞內(nèi)ROS含量增加

4、與GSH含量的降低在同一作用濃度和時(shí)間下相對(duì)應(yīng),且兩者的含量變化均表現(xiàn)出明顯的劑量時(shí)間效應(yīng),說(shuō)明該化合物導(dǎo)致細(xì)胞氧化脅迫升高。
　　(4)通過(guò)MTT測(cè)試顯示,與10、20μmol/L化合物單獨(dú)處理組相比,聯(lián)合NAC作用HL-6024h后,細(xì)胞的存活率均顯著回升;結(jié)合光學(xué)顯微鏡下觀察到的聯(lián)合作用組的細(xì)胞密度回升、細(xì)胞碎片減少、胞體恢復(fù)圓形,以及DCFH-DA染色法檢測(cè)的聯(lián)合作用組胞內(nèi)ROS含量的下降,均表明NAC是通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)的R

5、OS含量來(lái)抑制化合物對(duì)HL-60細(xì)胞的氧化損傷作用,說(shuō)明ROS的積累在該化合物誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用。
　　(5)對(duì)胞內(nèi)GSH檢測(cè)發(fā)現(xiàn),該化合物與NAC聯(lián)合作用HL-60細(xì)胞24h后,胞內(nèi) GSH含量與化合物單獨(dú)作用組相比上升不顯著。說(shuō)明 NAC的加入可能沒(méi)有影響GSH的含量,這可能與NAC的抗氧化活性作用方式有關(guān)。
　　以上結(jié)果顯示胞內(nèi)ROS含量的上升可能是化合物誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞周期阻滯并進(jìn)一步導(dǎo)致凋亡的