微小核糖核酸-34a對(duì)大鼠肥厚心肌組織肌球蛋白重鏈α基因表達(dá)的調(diào)控.pdf

1、背景與目的：
　　微小核糖核酸(MiroRNAs，miRNAs)是一類由內(nèi)源基因編碼的15-22個(gè)核苷酸序列的非編碼蛋白質(zhì)的單鏈RNA分子，通過結(jié)合靶基因mRNA的3'非編碼區(qū)而對(duì)靶基因的表達(dá)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。近年來研究表明心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展過程受多種微小核糖核酸調(diào)控。
　　心肌肥厚是一些臨床常見心血管疾?。ㄈ绺哐獕盒孕呐K病、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、心臟瓣膜病、先天性心臟病等）的共同病理學(xué)特征，表現(xiàn)為胚胎基因的激活和過度表達(dá)

2、、結(jié)構(gòu)和功能蛋白合成增多、細(xì)胞外基質(zhì)沉積等。肥厚心肌結(jié)構(gòu)功能改變與肌球蛋白重鏈基因表達(dá)“胚胎化”密切相關(guān)，即肌球蛋白重鏈α基因表達(dá)下調(diào)，肌球蛋白重鏈β基因表達(dá)上調(diào)，在哺乳類動(dòng)物心肌組織中肌球蛋白重鏈α基因表達(dá)下調(diào)是重要的心肌肥厚和心功能減退的分子生物學(xué)標(biāo)志。有研究表明利用特異性表達(dá)阻遏劑下調(diào)大鼠肥厚心肌組織微小核糖核酸-34a((MiroRNA-34a，miRNA-34a)表達(dá)水平，可表現(xiàn)出抑制心肌肥厚進(jìn)程、改善心功能的作用，其作用機(jī)制

3、和具體靶基因目前尚不明確，通過miRNA靶基因預(yù)測(cè)網(wǎng)站Targetscan，美國國家生物技術(shù)信息中心基因序列數(shù)據(jù)庫GenBank查找相關(guān)信息顯示，肌球蛋白重鏈α基因表達(dá)可能受miRNA-34a調(diào)控。本研究通過腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立左心室肥厚大鼠模型，探討miRNA-34a對(duì)大鼠肥厚心肌組織肌球蛋白重鏈α基因表達(dá)的調(diào)控作用，以及對(duì)肥厚心肌組織結(jié)構(gòu)和功能的影響。
　　方法：
　　將40只成年雄性Sprague-Dawley(SD)大

4、鼠隨機(jī)分為4組(n=10)，分別為腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后皮下注射miRNA-34a表達(dá)阻遏物組（ant-34a/AAC組），腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后皮下注射miRNA-34a表達(dá)阻遏物陰性對(duì)照物組（con/AAC組），假手術(shù)后皮下注射miRNA-34a表達(dá)阻遏物組（ant-34a/SH組），假手術(shù)后皮下注射miRNA-34a表達(dá)阻遏物陰性對(duì)照物組（con/SH組）。ant-34a/AAC和con/AAC組大鼠行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立壓力負(fù)荷性左心室肥厚模

5、型，ant-34a/SH組和con/SH組行假手術(shù)，不結(jié)扎腹主動(dòng)脈，其他處理與上兩組相同。各組大鼠分籠飼養(yǎng)5周后從第6周開始ant-34a/AAC組和ant-34a/SH組每周1、3、5皮下注射25mg/kg特異性miRNA-34a表達(dá)阻遏物L(fēng)NA-antimiR-34a，同時(shí)con/AAC組及con/SH組注射miRNA-34a阻遏物陰性序列物L(fēng)NA-control-34a，連續(xù)注射3周后測(cè)定各組大鼠左心室收縮末期壓、左心室舒張末期壓

6、及壓力最大變化速率，計(jì)算心肌肥厚指數(shù)，觀察心肌組織病理學(xué)改變，應(yīng)用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)大鼠左心室心肌組織miRNA-34a、肌球蛋白重鏈α基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、與con/AAC組相比，ant-34a/AAC組心肌肥厚指數(shù)、左心室收縮末期壓、左心室舒張末期壓以及miRNA-34a相對(duì)表達(dá)量降低，壓力最大變化速率、肌球蛋白重鏈α基因相對(duì)表達(dá)量明顯升高（P均＜0.05）;
　　2、

7、與con/AAC組相比，con/SH組心肌肥厚指數(shù)、左心室收縮末期壓、左心室舒張末期壓以及miRNA-34a相對(duì)表達(dá)量明顯降低，壓力最大變化速率、肌球蛋白重鏈α基因相對(duì)表達(dá)量明顯升高（P均＜0.05）;
　　3、與con/SH組相比，ant-34a/SH組miRNA-34a相對(duì)表達(dá)量明顯降低，肌球蛋白重鏈α基因相對(duì)表達(dá)量明顯升高（P均＜0.05），心肌肥厚指數(shù)、左心室收縮末期壓、左心室舒張末期壓、壓力最大變化速率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（