低功率高能聚焦超聲對胰腺癌移植瘤凋亡和基因表達影響的初步研究.pdf

1、研究目的：
　　評測低功率高強度聚焦超聲(high intensity focused ultra-sound，HIFU)治療人胰腺癌YY-1移植瘤的療效、安全性，探討低功率HIFU對腫瘤細胞凋亡的影響及其機制，以期為臨床應用提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1.BALB/c nu裸小鼠30只，隨機分為低功率組、高功率組、對照組，每組10只。建立人胰腺癌YY-1移植瘤裸鼠模型，并行HIFU輻照治療，治療期間觀察腫瘤體

2、積變化、腫瘤生長速率，記錄不良反應;各組分別于第7天、第14天收集腫瘤標本，Western blot方法分析Bax、Bcl-2表達情況，TUNEL法檢測各組腫瘤細胞凋亡率。
　　2.治療第7天分別收集低劑量組及對照組腫瘤組織，通過Agilent人類基因表達譜芯片檢測差異性基因表達。通過實時定量PCR(Quantitative Real time PCR)對篩選出的差異性基因進行驗證。
　　結果：
　　1.治療后，低功率

3、組、高功率組的腫瘤體積均小于對照組(P＜0.05)，兩組間未見顯著性差異（P＞0.05）;在第3天、第7天、第14天，低功率組、高功率組腫瘤生長速率明顯低于對照組，具有統(tǒng)計學差異(P＜0.001);兩組之間比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。與低功率組比較，高功率組不良反應增多，主要為皮膚燒傷和通道組織損傷(P＜0.05);
　　2.治療后第7天，與對照組比較，低功率組、高功率組Bax均表達上調，Bcl-2表達均下調，有統(tǒng)計學差異（

4、P＜0.05）;治療后第14天，與對照組比較，低功率組、高功率組Bax表達均進一步上調，Bcl-2表達均進一步下調，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);TUNEL結果顯示，治療后第7天、第14天，低功率組和高功率組細胞凋亡率均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，兩組間細胞凋亡率無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　3.表達譜芯片結果顯示，與對照組比較，低功率HIFU輻照后發(fā)生差異表達50倍以上的基因共4767個，其中上調39

5、58個，下調809個。GO分析(Gene Ontology，GO)和pathway分析結果提示，HIFU通過上調Fas、Bid、IL1-R、Apaf-1、Caspase-8、Caspase-9等關鍵基因表達，直接促進凋亡，還通過影響p53信號通道、MAPK信號通道、PI3K-Akt信號通道等多個信號通道中的關鍵基因間接促進腫瘤凋亡。
　　4.選取Caspase-8、Caspase-9、Fas、Bcl-xL行實時定量PCR驗證，結果

6、顯示擴增良好，并與表達譜芯片結果一致。
　　結論：
　　1.低功率、高功率HIFU治療胰腺癌移植瘤均有效，高功率組局部不良反應較多;低功率HIFU在療效不差于高功率HIFU的基礎上，安全性更好。
　　2.HIFU可上調促凋亡基因Bax的表達，下調抗凋亡基因Bcl-2的表達，并具有時間和劑量依賴關系。
　　3.低功率、高功率HIFU均可促進腫瘤細胞凋亡，兩組間腫瘤細胞凋亡率未見統(tǒng)計學差異。
　　4.低功率HI