短期高濃度氟對(duì)小鼠磨牙胚中牙本質(zhì)涎蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、背景：牙齒發(fā)育是由牙源性上皮與顱神經(jīng)嵴來(lái)源的外胚間充質(zhì)之間相互誘導(dǎo)、相互作用的復(fù)雜過(guò)程，其中，牙本質(zhì)不同于釉質(zhì)，來(lái)源于外胚間充質(zhì)，是由Ⅰ型膠原和牙本質(zhì)非膠原蛋白先形成支架，碳磷灰石晶體再結(jié)合到此支架上所形成。牙本質(zhì)涎蛋白（dentin sialoprotein，DSP）占非膠原有機(jī)成分中的多數(shù)，在牙本質(zhì)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。氟化物作為一種有效的防齲藥物，近年來(lái)得到廣泛應(yīng)用。然而，在牙齒發(fā)育階段通過(guò)急性和慢性的方式攝入過(guò)量的氟均會(huì)

2、抑制成牙本質(zhì)細(xì)胞的增殖分化及隨后的基質(zhì)合成與分泌，從而影響牙本質(zhì)的發(fā)育。其特異性發(fā)生機(jī)制目前尚無(wú)定論。
　　 目的：通過(guò)研究短期高濃度氟對(duì)新生小鼠下頜第一磨牙不同分化階段的成牙本質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞內(nèi)DSP表達(dá)的影響，探討過(guò)量氟對(duì)牙本質(zhì)發(fā)育的作用機(jī)制以及對(duì)DSP生物活性的影響。
　　 方法：從8窩4日齡（postnatal day 4，PND4）小鼠里隨機(jī)抽取32只，雌雄各半，根據(jù)單次腹腔注射藥物劑量的不同，按照完全隨機(jī)分配

3、的原則先分成兩組，即高劑量組（20mg/kg b.w.）和低劑量組（10mg/kg b.w.），每組16只，然后于各組中隨機(jī)分為NaF實(shí)驗(yàn)小組和NaCl對(duì)照小組，每小組內(nèi)動(dòng)物數(shù)量均為8只。注射藥物前稱(chēng)體重，注射時(shí)統(tǒng)一按10μl/g b.w (body weight，體重)進(jìn)行，即藥物高、低濃度分別為2mg/ml和1mg/ml，完成后所有小鼠返回各自母鼠。24小時(shí)后處死動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)前后對(duì)所有動(dòng)物稱(chēng)重，分析單次腹腔注射N(xiāo)aF和NaCl一日后的

4、小鼠體重參數(shù)有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用HE染色，光鏡下觀察不同濃度氟對(duì)小鼠下頜第一磨牙成牙本質(zhì)細(xì)胞不同分化時(shí)期的細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)變化，探討不同時(shí)期成牙本質(zhì)細(xì)胞對(duì)氟敏感性的差異。SP免疫組化技術(shù)檢測(cè)DSP在對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠下頜第一磨牙成牙本質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)定位，運(yùn)用生物圖像分析系統(tǒng)軟件測(cè)得相應(yīng)結(jié)果的平均光密度值。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：SPSS13.0(Statistical package for the social science，社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包)

5、 建立數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中未見(jiàn)動(dòng)物死亡，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，藥物注射24小時(shí)后，小鼠體重增長(zhǎng)在組間差異無(wú)顯著性。HE染色結(jié)果顯示：對(duì)照組（分別注射10mg/kg b.w.和20mg/kg b.w.的NaCl），分泌期成牙本質(zhì)細(xì)胞呈高柱狀整齊排列，細(xì)胞核遠(yuǎn)離基底膜，牙本質(zhì)基質(zhì)均勻紅染，其間可見(jiàn)牙本質(zhì)小管，成熟期成牙本質(zhì)細(xì)胞由高柱狀逐漸向矮立方狀轉(zhuǎn)化。實(shí)驗(yàn)組（分別注射10mg/kg b.w.和20mg/kg b

6、.w.的NaF），細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變大體相同，但存在細(xì)微差異：部分分泌晚期的成牙本質(zhì)細(xì)胞有時(shí)可見(jiàn)空泡性變，高度變矮，正常的柱狀結(jié)構(gòu)喪失，極性消失，排列紊亂，但這些損害被限制在相對(duì)孤立的區(qū)域，成牙本質(zhì)細(xì)胞上方的牙本質(zhì)表面可見(jiàn)不規(guī)則的改變。兩組中成熟期成牙本質(zhì)細(xì)胞及對(duì)應(yīng)的牙本質(zhì)均未見(jiàn)明顯異常。免疫組化染色結(jié)果顯示：DSP在成釉細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞、牙髓組織中均有表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，在前期牙本質(zhì)和牙本質(zhì)中也有陽(yáng)性表達(dá)，其表達(dá)在分泌期的成牙本