矽肺發(fā)生發(fā)展過(guò)程中CC16和SP-D變化規(guī)律研究.pdf

1、[研究目的]
　　 探討CC16和SP-D在矽肺發(fā)生發(fā)展過(guò)程中變化及作用，為矽肺早期診斷和早期治療療效評(píng)估提供依據(jù)。
　　 [研究方法]
　　 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):選擇SPF級(jí)雄性Wistar大鼠84只，體重160-180克。隨機(jī)將大鼠分為染矽塵組和對(duì)照組，每組42只。染矽塵組采用非氣管暴露法一次性氣管內(nèi)注入濃度為100mg/ml矽塵懸液1ml，對(duì)照組注入滅菌0.9％NaCl。染塵后分別在3d、7d、14d、21d、2

2、8d、60d6個(gè)時(shí)間點(diǎn)各取7只大鼠處死，進(jìn)行在體支氣管肺泡灌洗，取肺組織和支氣管肺泡灌洗液(BALF, bronchoalveolar lavage fluid)。肺組織經(jīng)多聚甲醛固定后石蠟包埋，切片，并做HE染色及免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)。觀察肺組織病理變化及免疫組化陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定大鼠BALF中CC16，SP-D濃度變化并做統(tǒng)計(jì)分析。
　　 2.人群研究:選取某金礦工人240名，其中Ⅰ期矽肺患者80

3、人，Ⅱ期矽肺患者40人，接塵組80人，對(duì)照組40人。ELISA法檢測(cè)血清中CC16及SP-D含量并進(jìn)行分析比較。
　　 [研究結(jié)果]
　　 1、染塵大鼠肺組織病理學(xué)觀察
　　 對(duì)照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)明顯病變;染矽塵組大鼠染塵3d肺組織出現(xiàn)充血，炎性細(xì)胞（中性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞）浸潤(rùn);7d充血明顯，肺泡間隔增寬且水腫，炎性細(xì)胞浸潤(rùn);14d肺泡間隔進(jìn)一步增寬，大量巨噬細(xì)胞增生、聚集;21d肺泡腔萎縮，部分消失，

4、肺泡間隔斷裂，炎性細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞;28d肺泡結(jié)構(gòu)大部分遭到破壞，成纖維細(xì)胞增生，膠原纖維增多，部分肺組織呈肺不張樣改變;60d肺泡結(jié)構(gòu)遭到嚴(yán)重破壞，肺廣泛纖維化。
　　 2、染塵大鼠肺組織免疫組化染色
　　 對(duì)照組大鼠Clara細(xì)胞形態(tài)正常完整，排列整齊，Clara細(xì)胞的胞漿中大量表達(dá)CC16蛋白。染矽塵3d組，與對(duì)照組相比無(wú)明顯改變，Clara細(xì)胞胞漿內(nèi)仍然高表達(dá)CC16蛋白;7d組細(xì)支氣管Clara細(xì)胞受

5、損，有少許細(xì)胞脫落;14d組細(xì)支氣管受損，Clara細(xì)胞大量脫落，CC16蛋白表達(dá)減少;21d時(shí)，CC16蛋白表達(dá)明顯減少，且Clara細(xì)胞受損加重，脫落明顯，呈現(xiàn)破損狀;28d組Clara細(xì)胞被成纖維細(xì)胞及膠原纖維細(xì)胞所取代;第60d時(shí)，CC16陽(yáng)性表達(dá)極少，肺組織廣泛纖維化。
　　 正常肺組織中的SP-D表達(dá)于肺泡Ⅱ型細(xì)胞和Clara細(xì)胞中，主要表達(dá)于肺泡Ⅱ型細(xì)胞。染矽塵組3d后，肺組織SP-D陽(yáng)性細(xì)胞增多不明顯;7d組，肺

6、泡Ⅱ型細(xì)胞SP-D陽(yáng)性表達(dá)增多，肺泡結(jié)構(gòu)未有明顯改變;14d時(shí)，肺泡結(jié)構(gòu)遭到破壞，SP-D強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);21d時(shí)，SP-D表達(dá)減少，肺泡結(jié)構(gòu)遭到破壞;第28d時(shí)，肺泡結(jié)構(gòu)遭到大量破壞，SP-D陽(yáng)性表達(dá)大量減少，細(xì)胞界限模糊;60d時(shí)，肺泡Ⅱ型細(xì)胞受破壞嚴(yán)重，肺組織廣泛纖維化，SP-D陽(yáng)性表達(dá)模糊不清。
　　 3、大鼠BALF中CC16，SP-D含量變化
　　 染矽塵大鼠BALF中CC16含量在各時(shí)間點(diǎn)較對(duì)照組均有不同程度的

7、降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，并且隨時(shí)間的延長(zhǎng)，含量逐漸減少。
　　 染矽塵大鼠BALF中SP-D含量在3d、7d、14d、21d時(shí)間點(diǎn)較對(duì)照組均有不同程度的升高，28d、60d較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，呈先增加后降低趨勢(shì)，在第14d時(shí)增高達(dá)高峰，此后開(kāi)始降低。
　　 4、人血清中CC16，SP-D含量變化
　　 與對(duì)照組相比，接塵組，矽肺Ⅰ期組、矽肺Ⅱ期組CC16及SP-D含量都

8、明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但接塵組、矽肺Ⅰ期組、矽肺Ⅱ期組之間CC16及SP-D含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 [研究結(jié)論]
　　 1、CC16和SP-D在矽塵引起的炎癥反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，兩者量的表達(dá)與肺組織病理改變密切相關(guān)。
　　 2、矽塵誘導(dǎo)大鼠BALF和接塵工人血清中CC16含量的不斷降低，檢測(cè)CC16可反映矽肺早期肺組織中Clara細(xì)胞的損傷情況。