魚腥草治療孕婦巨細(xì)胞病毒感染的臨床及實驗研究.pdf

1、研究課題:
　　 魚腥草治療孕婦巨細(xì)胞病毒感染的臨床及實驗研究。
　　 研究目的：
　　 探討中藥魚腥草治療人巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染的療效。運用高效液相色譜法(HPLC法)測定臨床治療孕婦巨細(xì)胞病毒感染的魚腥草抗病毒有效成分槲皮素的含量。研究魚腥草抗病毒有效成分槲皮素體外抗人巨細(xì)胞病毒(HCMV)的作用及其作用機制。
　　 研究設(shè)計：
　　 選用2007年12月-2009年6月，華中科技大學(xué)同

2、濟醫(yī)學(xué)院附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院(武漢市第一醫(yī)院)婦產(chǎn)科門診孕婦1900例進行篩查，檢測血清中人巨細(xì)胞病毒HCMV-IgG、IgM，發(fā)現(xiàn)HCMV-IgM陽性者60例作為研究對象。分組給予魚腥草煎劑及金葉敗毒顆粒進行治療14天后，復(fù)查HCMV-IgM轉(zhuǎn)陰率。運用高效液相色譜儀測定魚腥草抗病毒有效成分槲皮素的含量，并采用細(xì)胞培養(yǎng)實驗方法研究槲皮素體外抗人巨細(xì)胞病毒(HCMV)的作用及其作用機制。
　　 治療和觀察方法：
　　 1.

3、將HCMV-IgM陽性者60例按隨機數(shù)字表法分組：對照組30例，治療組30例。對照組用金葉敗毒顆粒(武漢中聯(lián)藥業(yè)集團股份有限公司生產(chǎn)，組成：大青葉、蒲公英、金銀花、魚腥草，每袋10g)治療，每日3次，每次1袋；治療組用魚腥草草藥30g，由武漢市第一醫(yī)院煎藥室統(tǒng)一煎制而成，每袋200ml.一次口服一袋，每日兩次，均服用14天。停藥1周后無菌抽取肘靜脈血4 ml，取血清于-20℃保存，復(fù)查HCMV-IgM轉(zhuǎn)陰率。
　　 2.觀察各治

4、療組治療后HCMV-IgM陽性轉(zhuǎn)陰率，采用ELISA法檢測，試劑HCMV-IgG、IgM，ELISA試劑盒購自美國Hope公司。
　　 3.HPLC法測定魚腥草抗病毒有效成分槲皮素的含量：采用AgilentZORBAX ODS色譜柱，以甲醇-0.4％磷酸(52∶48)為流動相；368nm波長處檢測，流速：1.0ml·min-1，柱溫：30℃。
　　 4.用魚腥草抗病毒有效成分槲皮素配成不同濃度的溶液，噻唑藍比色法(MTT

5、)檢測細(xì)胞毒性，槲皮素不同濃度溶液分別作用于被HCMV感染的細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，MTT法檢測細(xì)胞存活率來探討槲皮素對HCMV感染的細(xì)胞治療作用、對HCMV在細(xì)胞內(nèi)增殖的抑制作用及預(yù)防作用，從而對其抗病毒機制進行研究。
　　 統(tǒng)計學(xué)方法：
　　 臨床觀察計量資料數(shù)據(jù)均輸入SPSS13.0軟件作t檢驗及x2檢驗。
　　 細(xì)胞培養(yǎng)實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析。
　

6、　 結(jié)果：
　　 1.對照組用藥前后HCMV-IgM轉(zhuǎn)陰率73.3％，P＜0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。治療組用藥前后HCMV-IgM轉(zhuǎn)陰率70.0％，P＜0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。治療組與對照組相比較，u=0.2837，P＞0.05，差異無顯著性。
　　 2.HPLC法測定魚腥草抗病毒有效成分槲皮素的含量：線性范圍為0.24-1.20μ g，相關(guān)系數(shù)r=0.9973，平均回收率為98.75％，RSD=0.66％。

7、r>　　 3.槲皮素的半數(shù)中毒濃度為{TC50}4.75mg/ml，對HCMV在細(xì)胞內(nèi)增殖的治療作用及預(yù)防作用的半數(shù)有效濃度{EC50}分別為0.30 mg/ml和0.25mg/ml，治療指數(shù)為{TI}15.83。
　　 結(jié)論：
　　 孕婦感染巨細(xì)胞病毒后自然轉(zhuǎn)陰率大約在40％左右，這將會導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)和經(jīng)產(chǎn)道感染巨細(xì)胞病毒，造成孕婦流產(chǎn)、早產(chǎn)，胎兒畸形及出生缺陷等嚴(yán)重后果。中藥魚腥草治療孕產(chǎn)婦人巨細(xì)胞病毒感染療效顯著，