GM—CSF基因cDNA克隆和序列分析.pdf

1、目的:目前,國(guó)內(nèi)應(yīng)用的huGM-CSF產(chǎn)品也多為原核表達(dá)產(chǎn)物,而且多為進(jìn)口制劑,他們應(yīng)用于國(guó)人是否合理,至今尚不清楚,國(guó)內(nèi)huGM-CSF克隆和測(cè)序的報(bào)道也相對(duì)較少.所以,目前有必要深入研究國(guó)人GM-CSF基因序列及GM-CSF的特點(diǎn).本研究目的就是在國(guó)內(nèi)克隆GM-CSF基因cDNA并進(jìn)行測(cè)序,為進(jìn)一步研究國(guó)人GM-CSF基因提供數(shù)據(jù),并為GM-CSF在我國(guó)臨床上的合理應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:取健康人新鮮肝素抗凝的外周靜脈血,以等

2、量PBS稀釋后,用淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行密度梯度離心,收集單個(gè)核細(xì)胞.將收集的單個(gè)核細(xì)胞,用含小牛血清、青霉素和鏈霉素的DMEM重懸,取一滴重懸液涂片Giemsa-Wright染色,高倍鏡下觀察單個(gè)核細(xì)胞.另取一滴重懸液,與臺(tái)酚蘭染液混合,于血球計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù).然后,用含小牛血清、植物血凝素、佛波酯、青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液分三組分別培養(yǎng)所收集的單個(gè)核細(xì)胞,培養(yǎng)時(shí)間依組為2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí),然后收集各組培養(yǎng)細(xì)胞,并再次Giemsa-