“促育生精方”調(diào)節(jié)環(huán)磷酰胺致少弱精癥模型大鼠精子特異性鈣通道CatSper1、CatSper2的機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討“促育生精方”對環(huán)磷酰胺(CP)致少弱精癥模型大鼠精子特異性鈣通道蛋白CatSper1、CatSper2的影響，并探討其調(diào)節(jié)機(jī)制，為該方的臨床療效提供可靠的科學(xué)依據(jù)。
　　方法：將50只雄性、13周齡Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)6天，隨機(jī)分為模型組（MG）、空白對照組（BCG）、低劑量藥物組（LDCG）、中劑量藥物組（MDCG）、高劑量藥物組（HDCG），每組十只。 BCG腹腔注射生理鹽水；MG、LDCG、MDCG、HDC

2、G腹腔注射CP30mg/（kg·d），共5天。建立大鼠少弱精子癥模型后，LDCG、MDCG、HDCG大鼠每天3ml促育生精方免煎顆粒藥液灌胃，（低、中、高劑量對映濃度為1.73mg/ml、
　　3.47mg/ml、6.93mg/ml），BCG和MG用生理鹽水灌胃，持續(xù)30天。末次給藥24 h后，迅速取出動物精子標(biāo)本。光學(xué)顯微鏡檢測精子數(shù)目、精子活力，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，采用實時熒光定量PCR法檢測CatSper1

3、mRNA、CatSper2 mRNA在各組大鼠精子中的表達(dá)；用蛋白免疫印跡法檢測CatSper1蛋白，CatSper2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：成功建立少弱精子癥大鼠模型。與BCG比較，MG的精子數(shù)目、a級、a+b級精子比率,細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度、CatSper1 mRNA、CatSper2 mRNA及其相應(yīng)蛋白表達(dá)量顯著降低(P<0.05)；與MG比較，各劑量藥物治療組精子數(shù)目均增加(P<0.05)，MDCG、HDCG的a級、a+b