放射治療與恩度不同聯(lián)合模式對人鼻咽癌細(xì)胞體內(nèi)外生長及放射敏感性影響的實驗研究.pdf

1、本研究包括二部分：
　　 第一部分：放射線與恩度不同聯(lián)合模式對人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2細(xì)胞 VEGF表達及放射敏感性的影響
　　 目的:探討放射線聯(lián)合恩度(Endostar)的不同模式對人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2中VEGF表達及放射敏感性的作用。
　　 方法：1. MTT法檢測不同濃度(5-640 μg/ml)Endostar 作用24小時后對人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2 生長的影響；2.照射聯(lián)合Endostar 作用

2、于人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2的方案共分為6組：單用Endostar(E組)、單純照射(R組)、使用Endostar 4小時后照射(E4R組)、使用Endostar 24小時后照射(E24R組)、先照射隔4小時后使用Endostar(R4E)、先照射隔24小時后使用Endostar(R24E)，RT-PCR和Western blot檢測各組VEGF的表達；3. 克隆形成試驗：不同濃度Endostar(0、25、125μg/ml)作用于人鼻咽

3、癌細(xì)胞株CNE-2，各濃度組分別給與不同劑量鈷-6o 照射，經(jīng)多靶單擊模型擬合細(xì)胞存活曲線，獲得不同處理組的放射增敏比。
　　 結(jié)果：1. Endostar對CNE-2細(xì)胞的IC50為(3.01±0.12)mg/ml；2. 當(dāng)照射劑量為1-5Gy，單純照射使CNE-2中VEGF表達水平隨放射劑量增高而降低(P<0.05)；當(dāng)照射劑量為2 Gy時，照射聯(lián)合恩度的各處理組(E4R、E24R、R4E和R24E組)均較單純照射組能更大程

4、度的下調(diào)VEGF mRNA和蛋白表達水平(P<0.05)，在Endostar 濃度為80 μg/ml時，E24R組較其余各組能最大程度的抑制VEGF mRNA和蛋白表達(P<0.05)；E4R、E24R、R4E和R24E組中VEGF表達水平僅在Endostar 為5μg/ml、20 μg/ml和80 μg/ml時隨藥物濃度增高而降低，在Endostar 濃度為125μg/ml和200 μg/ml時，VEGF表達水平隨藥物濃度增高而增高；

5、3. Endostar 為25μg/ml和125μg/ml時，放射增敏比分別為1.28和1.43。
　　 結(jié)論：放射線聯(lián)合Endostar 較單純照射和單純用藥可以更大程度的抑制CNE-2細(xì)胞VEGF表達；當(dāng)Endostar 為80 μg/ml，E24R組較其余各組能最大程度的抑制VEGF表達；Endostar對CNE-2細(xì)胞有放射增敏作用。
　　 第二部分：放射治療與恩度不同聯(lián)合模式對鼻咽癌裸鼠移植瘤生長及腫瘤放射敏感

6、性的影響
　　 目的：通過構(gòu)建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，研究放射治療聯(lián)合恩度的不同模式對鼻咽癌移植瘤生長的抑制作用及對腫瘤放射敏感性的影響。
　　 方法：構(gòu)建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，按隨機數(shù)字表法將其分為7組，分別給予瘤內(nèi)注射生理鹽水(對照組)、5mg/kg 恩度(E1組)、10mg/kg 恩度(E2組)、50mg/kg 恩度(E3組)、10 Gy 放射線照射(R組)、10 Gy 放射線照射后注射50mg/kg恩度(R+E

7、組)、注射50mg/kg 恩度2 天后予10 Gy 放射線照射(E+R組)，恩度均為連續(xù)瘤內(nèi)注射14 天。分時段測量腫瘤體積，注射后1周處死動物，切除腫瘤，免疫組化檢測腫瘤組織微血管密度(MVD)、VEGF和HIF-1a表達，免疫熒光雙標(biāo)檢測腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型。瘤內(nèi)連續(xù)注射恩度對鼻咽癌移植瘤生長有抑制作用，且表現(xiàn)為劑量依賴性，治療第22 天E3組的腫瘤平均體積(4.11±0.16c

8、m 3)較對照組(7.01±0.32 cm 3)有較大程度抑制(P<0.05)；恩度對鼻咽癌移植瘤有放射增敏作用，E+R組的腫瘤生長延遲時間(10.5±1.0天)明顯長于R+E組(6.5±0.8 天)、R組(3.8±0.5天)和E3組(2.5±0.2 天)，P<0.05；單純瘤內(nèi)注射恩度能導(dǎo)致腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，且呈劑量依賴性，放射治療聯(lián)合恩度能促進各單純治療組的致腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡作用；E+R組的平均MVD 較對照組平均MVD 下

9、降了87[％]，下降程度明顯高于E3組(32[％])和R組(41[％])，P<0.05；免疫組化半定量分析得出，單純恩度組(E1-E3組)能下調(diào)移植瘤組織中VEGF和HIF-1a表達，且呈劑量依賴性，E+R組和R+E組對VEGF和HIF-1a表達的抑制作用均大于對照組、E3組和R組。
　　 結(jié)論：瘤內(nèi)注射恩度能抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長；恩度對鼻咽癌移植瘤有放射增敏作用；恩度可以導(dǎo)致腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，放射治療聯(lián)合恩度能促進