血紅素氧合酶對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷鈣超載及細(xì)胞粘附因子的作用.pdf

1、休克、消化道出血以及肝臟移植等常不可避免引發(fā)肝臟缺血，血流再通后肝臟代謝功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷反而加重，這種現(xiàn)象就是肝臟缺血再灌注(IR)損傷。IR是普遍存在的病理生理過程，因此探索其損傷的機(jī)制，尋求保護(hù)缺血肝細(xì)胞的方法，是一項(xiàng)亟待解決的課題。 肝臟IR損傷是一個(gè)多因素的復(fù)雜過程，目前認(rèn)為IR損傷發(fā)生的基本機(jī)制，主要是氧自由基(OFR)生成增多和細(xì)胞內(nèi)鈣超載的作用，同時(shí)炎癥反應(yīng)、中性粒細(xì)胞浸潤、微循環(huán)障礙也與IR損傷關(guān)系密切。

2、 血紅素氧合酶(HO)主要分布在肺臟、肝臟、脾臟、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，是血紅素代謝的限速酶，分解血紅素形成等量的一氧化碳(CO)及膽綠素并釋放鐵原子。HO及其代謝產(chǎn)物通過抗氧化、抗炎癥、維持微循環(huán)等作用對(duì)抗IR損傷。 細(xì)胞內(nèi)鈣超載被認(rèn)為是細(xì)胞不可逆損傷的共同通路。在生理情況下，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度主要依賴細(xì)胞膜Ca2+-ATP酶對(duì)Ca2+的運(yùn)輸來調(diào)控。 中性粒細(xì)胞是參與IR損傷過程的重要細(xì)胞成份之一。細(xì)胞間粘附因子(ICAM-

3、1)是介導(dǎo)中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附的主要粘附因子，在再灌注損傷中起重要作用。 目的：本研究應(yīng)用HO誘導(dǎo)劑(hemin)和抑制劑(ZnPP)來研究HO-CO系統(tǒng)對(duì)大鼠肝臟IR損傷Ca2+-ATP酶和ICAM-1的影響。 方法： 1.模型的制備與分組：以10％水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠后，取腹正中切口入腹，顯露肝臟，血管夾住肝中葉和左外側(cè)葉的肝動(dòng)脈、門靜脈，造成70％肝臟缺血模型。鉗夾45min后，松開血管鉗，恢復(fù)血

4、流，大鼠IR模型制備完成。取肝中葉及靜脈血作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。將雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、IR組、hemin組、ZnPP組。其中hemin組于術(shù)前12h腹腔內(nèi)注射hemin20mg/kg，再進(jìn)行IR；ZnPP組于術(shù)前3h和16h，分兩次腹腔內(nèi)注射ZnPP各10μmol/kg，然后進(jìn)行IR。 2.生化指標(biāo)測(cè)定：在再灌注0h、90min、4h、8h，取血漿，測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)。 3.C

5、a2+-ATP酶的活性的測(cè)定：取肝組織制成組織勻漿，用化學(xué)比色法，具體操作按南京建成生物工程研究所提供的測(cè)試盒說明書進(jìn)行。 4.肝臟組織學(xué)檢查：采用石蠟切片，HE染色。 5.ICAM-1免疫組織化學(xué)染色：脫蠟至水，抗原熱修復(fù)后，用3％過氧化氫孵育10min。封閉一抗4℃過夜，陰性對(duì)照用PBS代替一抗。先后滴加二抗、三抗各17min，后用3,3-二氨基苯聯(lián)胺(DAB)顯色，復(fù)染后封片。 結(jié)論： 1.肝臟IR

6、損傷后，肝功能出現(xiàn)損害，表現(xiàn)為ALT、AST水平增高。組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹、脂肪變性、炎細(xì)胞浸潤、肝竇擴(kuò)張和細(xì)胞壞死等表現(xiàn)。hemin能有效的減輕IR損傷所造成的肝功能損害，表現(xiàn)在ALT、AST水平降低；肝細(xì)胞腫脹、變性減輕。ZnPP則加重IR損傷，表現(xiàn)與hemin作用相反。 2.肝臟IR損傷后，Ca2+-ATP酶活力隨時(shí)間的延長而降低。hemin能夠增加Ca2+-ATP酶活力；而ZnPP可使Ca2+-ATP酶活力明顯降低